中 中 國(guó) 國(guó) 瓜 瓜 菜 菜 2021 34 11 17 23 試驗(yàn)研究 收 稿 日 期 2021 05 24 修 回 日 期 2021 08 11 基 金 項(xiàng) 目 國(guó) 家 重 點(diǎn) 研 發(fā) 計(jì) 劃 2020YFD1000300 西 甜 瓜 產(chǎn) 業(yè) 技 術(shù) 體 系 CARS 25 作 者 簡(jiǎn) 介 唐 思 琪 女 在 讀 碩 士 研 究 生 主 要 從 事 種 子 生 產(chǎn) 與 加 工 E mail tsq t 通 信 作 者 戴 思 慧 女 副 教 授 主 要 從 事 西 瓜 甜 瓜 種 子 生 產(chǎn) 與 加 工 E mail daisihui 細(xì) 菌 性 果 斑 病 Bacterialfruitblotch BFB 是 為 害 西 甜 瓜 的 重 要 病 害 之 一 也 是 我 國(guó) 對(duì) 內(nèi) 和 對(duì) 外 的 檢 疫 對(duì) 象 其 病 原 菌 是 西 瓜 噬 酸 菌 Acidovorax citrulli Ac 屬 于 革 蘭 氏 染 色 陰 性 菌 是 一 種 活 體 營(yíng) 養(yǎng) 型 細(xì) 菌 該 病 是 典 型 的 種 傳 病 害 嚴(yán) 重 影 響 瓜 果 品 質(zhì) 和 產(chǎn) 量 在 很 多 國(guó) 家 和 地 區(qū) 都 有 發(fā) 生 目 前 在 我 國(guó) 的 河 南 內(nèi) 蒙 古 山 東 陜 西 甘 肅 新 疆 海 南 等 省 自 治 區(qū) 均 有 該 病 的 報(bào) 道 1 Ac 不 僅 能 侵 染 25 種 藥 劑 處 理 對(duì) 西 瓜 種 傳 細(xì) 菌 性 果 斑 病 菌 的 抑 制 效 果 唐 思 琪 孫 小 武 何 長(zhǎng) 征 蘭 相 祎 蔡 雁 平 戴 思 慧 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院 長(zhǎng)沙 410128 摘 要 細(xì) 菌 性 果 斑 病 是 一 種 為 害 西 瓜 生 產(chǎn) 的 種 傳 病 害 病 原 菌 為 西 瓜 噬 酸 菌 種 子 消 毒 是 防 治 細(xì) 菌 性 果 斑 病 的 首 要 措 施 采 用 平 板 抑 菌 圈 法 從25 種 殺 菌 劑 中 篩 選 出8 種 對(duì) 西 瓜 噬 酸 菌 抑 菌 效 果 好 的 藥 劑 其 中5000mg L 1 殺 菌 劑1 號(hào)AS 平 均 抑 菌 圈 直 徑 最 大 用 這 些 藥 劑 對(duì) 帶 菌 西 瓜 種 子 進(jìn) 行 處 理 結(jié) 果 表 明 5000 2500 1250mg L 1 的 殺 菌 劑1 號(hào)AS 1000 2000mg L 1 的25 寡 糖 乙 蒜 素ME 100000mg L 1 的80 乙 蒜 素EC 和300 150mg L 1 的3 噻 霉 酮WP 都 有 較 好 的 殺 菌 效 果 其 中25 寡 糖 乙 蒜 素ME 和 殺 菌 劑1 號(hào)AS 雖 有 殺 菌 作 用 但 濃 度 過(guò) 高 會(huì) 影 響 種 子 萌 發(fā) 100000mg L 1 80 乙 蒜 素EC 處 理 的 種 子 發(fā) 芽 率 與 對(duì) 照 相 比 提 高 了22 22 300 150mg L 1 的3 噻 霉 酮WP 處 理 的 種 子 發(fā) 芽 率 分 別 比 對(duì) 照 提 高58 73 53 97 試 驗(yàn) 結(jié) 果 表 明 乙 蒜 素 和 噻 霉 酮 對(duì) 西 瓜 嗜 酸 菌 有 抑 菌 作用的同時(shí)不會(huì)抑制種子萌發(fā) 噻霉酮促生效果更佳 可初步作為防治細(xì)菌性果斑病的種子處理劑 關(guān)鍵詞 西瓜 細(xì)菌性果斑病 平板抑菌法 種子處理 殺菌劑 中圖分類(lèi)號(hào) S651 S482 2 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1673 2871 2021 11 017 07 Inhibitory effect of 25 bactericide on watermelon bacterial fruit blotch byseedtreatment TANGSiqi SUNXiaowu HEChangzheng LANXiangyi CAIYanping DAISihui HunanAgriculturalUniversityCollegeofHorticulture Changsha410128 Hunan China Abstract Bacterial fruit blotch Acidovorax citrulli is a highly harmful seed borne disease on watermelon Once the disease occurs it will cause serious loss of watermelon production Seed disinfection is the first measure to prevent and control bacterial fruit blotch In this experiment the plate inhibition zone method was used to screen out 8 agents with good antibacterial effect on AC from 25 fungicides Among them 5000 mg L 1 fungicidal No 1 had the largest average bacteriostaticzone Afterthetreatmentofwatermelonseedswiththeseagents itwasfoundthat5000mg L 1 2500mg L 1 1250 mg L 1 fungicide AS 1000 mg L 1 and 2000 mg L 1 25 oligosaccharide Elicin ME The 100 000 mg L 1 80 acetallicinEC 300mg L 1 and150mg L 1 3 thiamethanoneWPshowedgoodgermicidaleffectonnewseeds Although 25 oligosaccharide acetallicin ME and fungicide No 1 AS had germicidal effect they would inhibit new seed germination with too high concentration Compared with the control the germination rate of 100 000 mg L 1 80 ethyl allicin EC was increased by 22 22 and the 3 thiamethanone WP of 300 mg L 1 and 150 mg L 1 were increased by more than 50 Moreover the germination of seeds was obviously promoted by 80 ethyl allicin EC It was found that both ethicallin and thiamelone had antibacterial effect on acidophagocytes and did not inhibit new seed germination thiamelonehadbettereffectonpromotinggrowthandcouldbeusedasseedtreatmentagentforpreventingandcontrolling bacterialfruitblotch Keywords Watermelon Bacterialfruitblotch Platebacteriostaticmethod Seedtreatment Bactericide 17 中 國(guó) 瓜 菜 第34 卷 試驗(yàn)研究 葫 蘆 科 作 物 在 番 茄 茄 子 等 茄 科 植 物 的 種 子 中 與 西 瓜 套 種 的 甘 薯 中 也 曾 被 檢 測(cè) 到 2 3 西 瓜 的 苗 期 和 成 株 期 皆 可 發(fā) 病 染 病 初 期 子 葉 和 葉 緣 會(huì) 出 現(xiàn) 壞 死 斑 點(diǎn) 隨 后 感 染 真 葉 形 成 病 斑 果 實(shí) 染 病 后 果 皮 會(huì) 出 現(xiàn) 斑 點(diǎn) 逐 漸 擴(kuò) 大 成 片 狀 并 深 入 果 肉 感 病 處 可 能 會(huì) 出 現(xiàn) 白 色 的 細(xì) 菌 分 泌 物 或 滲 出 物 并 伴 隨 著 其 他 雜 菌 侵 染 最 終 造 成 全 果 腐 爛 3 BFB 主 要 的 帶 菌 媒 介 是 種 子 其 次 是 感 病 植 株 果 實(shí) 土 壤 等 其 可 附 著 在 種 子 表 面 并 可 在 種 皮 下 外 胚 乳 層 存 活4 5 個(gè) 月 4 染 菌 種 子 是 該 病 害 遠(yuǎn) 距 離 傳 播 的 主 要 途 徑 建 立 安 全 有 效 的 種 子 消 毒 處 理 技 術(shù) 是 防 控 瓜 類(lèi) 細(xì)菌性果斑病的首要環(huán)節(jié) 目 前 生 產(chǎn) 中 常 用 的 防 治 細(xì) 菌 性 果 斑 病 的 種 子 處 理 方 法 有 物 理 防 治 和 化 學(xué) 防 治 物 理 防 治 中 干 熱 處 理 是 較 常 見(jiàn) 的 方 式 通 常 將 種 子 70 干 熱 處 理72h 對(duì) 種 子 外 部 和 內(nèi) 部 的 病 菌 都 有 一 定 的 消 毒 作 用 5 6 也 有 人 將 處 理 溫 度 提 高 至75 處 理 時(shí) 間 縮 短 至48h 就 可 以 完 全 殺 滅 西 瓜 細(xì) 菌 性 果 斑 病 菌 且 不 抑 制 種 子 萌 發(fā) 7 但 干 熱 處 理 受 種 子 顆 粒 大 小 限 制 且 會(huì) 影 響 種 子 的 耐 貯 藏 性 不 宜 久 放 5 只 能 當(dāng) 年 種 所 以 物 理 消 毒 并 不 是 最 廣 泛 的 應(yīng) 用 方 法 化 學(xué) 藥 劑 處 理 是 防 治 種 子 帶 菌 的 主 要 措 施 之 一 通 常 在 播 種 前 用40 甲 醛 鹽 酸 雙 氧 水 過(guò) 氧 乙 酸 酸 性 電 解 水 浸 泡 西 瓜 種 子 達(dá) 到 殺 菌 目 的 3 8 這 種 方 法 操 作 簡(jiǎn) 便 成 本 低 但 由 于 藥 劑 本 身 的 毒 性 殺 菌 效 果 強(qiáng) 的 藥 劑 可 能 會(huì) 抑 制 種 子 萌 發(fā) 甚 至 給 周 圍 環(huán) 境以及人畜帶來(lái)污染 筆 者 選 擇 了 常 用 于 防 治 細(xì) 菌 性 病 害 的25 種 藥 劑 并 對(duì) 其 進(jìn) 行 抑 菌 種 子 發(fā) 芽 指 標(biāo) 測(cè) 定 以 期 篩 選 出 安 全 高 效 的 種 子 殺 菌 處 理 劑 為 該 病 害 的 防 治 提 供依據(jù) 1 材料與方法 1 1 材料 供 試 品 種 為 黑 媚 娘 有 籽 西 瓜 種 子 由 湖 南 雪 峰 種 業(yè) 有 限 公 司 提 供 供 試 病 原 菌 西 瓜 噬 酸 菌 菌 株 Ac 由 中 國(guó) 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 院 植 物 保 護(hù) 研 究 所 提 供 供 試 培 養(yǎng) 基 KB 培 養(yǎng) 基 蛋 白 胨20g L 1 瓊 脂18g L 1 硫 酸 鎂1 5g L 1 磷 酸 二 氫 鉀1 5g L 1 甘 油10mL L 1 制 做 平 板 時(shí) 加15mg L 1 氨 芐 青 霉 素 供 試 藥 劑 見(jiàn) 表1 1 2 方法 試 驗(yàn) 于2020 年8 11 月 在 湖 南 農(nóng) 業(yè) 大 學(xué) 蔬 菜 瓜類(lèi)研究所內(nèi)進(jìn)行 1 2 1 染 菌 種 子 制 備 1 西 瓜 噬 酸 菌 菌 懸 液 制 作 在 超 凈 工 作 臺(tái) 操 作 用 無(wú) 菌 接 種 環(huán) 從KB 固 體 培 養(yǎng) 基 上 挑 取 少 許 培 養(yǎng)48h 左 右 的Ac 單 菌 落 輕 彈 于 裝 了 35 mLKB 液 體 培 養(yǎng) 基 的 無(wú) 菌 離 心 管 中 密 封 好 置 于28 搖 床220r min 1 振 蕩 培 養(yǎng)48h 用 分 光 光 度 計(jì) 測(cè) 定OD600 值 達(dá) 到0 6 左 右 備 用 2 制 備 染 菌 種 子 采 用 針 刺 接 種 法 即 用75 酒 精 將 已 成 熟 的 健 康 黑 媚 娘 西 瓜 果 實(shí) 表 皮 消 毒 后 用 無(wú) 菌 刀 片 切 開(kāi) 大 小 為4cm 4cm 的 小 孔 將 配 制 好 的 菌 懸 液 用 無(wú) 菌 注 射 器 注 入 西 瓜 內(nèi) 部 然 后 用 保 鮮 膜 封 住 西 瓜 表 皮 傷 口 28 溫 度 下 放 置2 4d 西 瓜 表 皮 出 現(xiàn) 病 斑 后 即 為 發(fā) 病 可 收 獲 染 菌 種 子 洗 凈 風(fēng) 干 后 備 用 3 試 紙 條 初 篩 使 用 燕 麥 嗜 酸 菌 檢 測(cè) 試 紙 條AISK14800 0025 進(jìn) 行 檢 測(cè) 將20 粒 染 菌 西 瓜 種 子 放 入 裝 有 20 mL 無(wú) 菌 水 的 錐 形 瓶 中 置 于 28 搖 床220r min 1 振 蕩 培 養(yǎng)4h 后 倒 入 樣 品 袋 將 試 紙 條 放 入 樣 品 袋 中 30 min 后 觀 察 結(jié) 果 測(cè) 試 線(xiàn) 與 質(zhì) 控 線(xiàn) 皆 呈 現(xiàn) 紅 色 則 為 陽(yáng) 性 表 示 種 子 表 面 帶 有 Ac 9 4 PCR 法 將 3 中 的 菌 液 作 為 PCR 模 板 10 11 使 用 特 異 性 引 物WBF1 WBF2 對(duì)Ac 進(jìn) 行 擴(kuò) 表1 供試藥劑 編號(hào) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 名稱(chēng) 15 惡霉靈AS 40 喹啉銅SC 50 多抗 喹啉銅WP 3 噻霉酮WP 46 氫氧化銅WG 50 氯溴異氰尿酸SP 25 寡糖 乙蒜素ME 5 春雷 中生WP 47 春雷 王銅WP 20 嗎胍 乙酸銅WP 45 精甲霜靈 王銅WP 殺菌劑1 號(hào)AS 枯 草 芽 孢 桿 菌 第 一 細(xì) AS 枯草芽孢桿菌DP 解淀粉芽孢桿菌DP 地衣芽孢桿菌DP 熒光假單胞桿菌DP 0 3 四霉素AS 72 鏈霉素WP 20 噻菌銅SC 20 噻唑鋅SC 30 噻唑鋅SC 20 噻森銅SC 8 春雷 噻霉酮WG 80 乙蒜素EC 生產(chǎn)廠家 濟(jì)南金地農(nóng)藥有限公司 陜西美邦藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司 興農(nóng)藥業(yè)有限公司 陜西西大華特科技實(shí)業(yè)有限公司 美國(guó)杜邦公司 河北上瑞生物科技有限公司 海南正業(yè)中農(nóng)高科技股份有限公司 陜西標(biāo)正作物科學(xué)有限公司 山東榮邦化工有限公司 黑 龍 江 省 齊 齊 哈 爾 四 友 化 工 有 限 公 司 浙江禾本科技有限公司 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所 廣 東 植 物 龍 生 物 技 術(shù) 股 份 有 限 公 司 北海強(qiáng)興生物科技有限公司 北海強(qiáng)興生物科技有限公司 北海強(qiáng)興生物科技有限公司 報(bào)喜康生物科技有限公司 遼寧微科生物工程股份有限公司 青島潤(rùn)天生物科技有限公司 浙江龍灣化工有限公司 浙江新農(nóng)化工股份有限公司 浙江新農(nóng)化工股份有限公司 浙江東風(fēng)化工有限公司 陜西西大華特科技實(shí)業(yè)有限公司 開(kāi)封大地農(nóng)化生物科技有限公司 18 第11 期 等 果斑病菌的抑制效果 試驗(yàn)研究 增 引 物 由 長(zhǎng) 沙 博 儀 生 物 技 術(shù) 有 限 公 司 合 成 PCR 反 應(yīng) 體 系 上 下 游 引 物 各1 L TaqPCRMasterMix 10 L 無(wú) 菌 水 7 L 模 板 1 L 共 20 L 擴(kuò) 增 程 序 98 預(yù) 變 性 3 min 98 變 性 10 s 62 退 火 10s 72 延 長(zhǎng)30s 35 個(gè) 循 環(huán) 72 再 延 長(zhǎng)5min 4 保 存 5 苗 期 觀 察 隨 機(jī) 選 取 45 粒 染 菌 西 瓜 種 子 播 種 于 規(guī) 格 為 5 10 孔 的 穴 盤(pán) 中 使 用 保 濕 盒 隔 離 放 置 于 室 外 生 長(zhǎng) 溫 度 22 28 觀 察 并 記 錄 發(fā) 病 狀 況 以 健 康 西 瓜 種 子 在 同 一 條 件 下 播 種 作為對(duì)照 1 2 2 平 板 抑 菌 法 篩 選 藥 劑 將 待 測(cè) 藥 劑 用 純 水 稀 釋4 個(gè) 濃 度 備 用 挑 取Ac 單 菌 落 接 種 于KB 液 體 培 養(yǎng) 基 中 置 于 28 搖 床 220 r min 1 振 蕩 培 養(yǎng) 36 h 用 無(wú) 菌 水 將 菌 懸 液 濃 度 調(diào) 至 OD6000 3 0 4 OD6000 3 10 8 cfu mL 1 12 備 用 將 制 備 好 的 菌 懸 液 和 降 溫 至40 45 的KB 培 養(yǎng) 基 按1 10 混 勻 每 個(gè) 培 養(yǎng) 皿 倒 入 約 20 mL 的 混 菌 KB 培 養(yǎng) 基 凝 固 備 用 每 個(gè) 混 菌 培 養(yǎng) 基 中 放 入4 片 直 徑5mm 的 滅 菌 濾 紙 片 讓 其 輕 輕 貼 附 于 平 板 表 面 其 中 3 片 分 別 滴 入 10 L 相 同 濃 度 的 藥 劑 1 片 滴 入 10 L 無(wú) 菌 水 作 為 陰 性 對(duì) 照 每 個(gè) 藥 劑 濃 度 3 次 重 復(fù) 即 每 個(gè) 藥 劑 濃 度 設(shè) 置 3 個(gè) 平 板 培 養(yǎng) 皿 將 封 好 的 培 養(yǎng) 皿 放 入28 恒 溫 箱 培 養(yǎng)20h 后 用 十 字 交 叉 法 兩 條 直 徑 的 平 均 值 測(cè) 量 抑 菌 圈 直 徑 平 均 抑 菌 圈 直 徑 為 5 mm 時(shí) 表 明 藥 劑 無(wú) 抑 菌 作 用 大 于 5 mm 則 表 示 有 抑 菌 作 用 試 驗(yàn) 數(shù) 據(jù) 采 用Excel2007 SPSS 26 軟件處理 1 2 3 藥 劑 處 理 染 菌 種 子 的 檢 測(cè) 通 過(guò) 以 上 平 板 試 驗(yàn) 篩 選 得 到 有 顯 著 抑 菌 效 果 的 藥 劑 對(duì) 西 瓜 種 子 進(jìn) 行 處 理 進(jìn) 一 步 測(cè) 定 種 子 帶 菌 量 和 萌 發(fā) 情 況 用 不 同 濃 度 的 藥 劑 浸 泡 染 菌 種 子 20 30 min 而 后 用 流 水 沖 洗10min 左 右 以 清 水 處 理 種 子 作 為 對(duì) 照 每 個(gè) 處 理50 粒 種 子 處 理 后 陰 干 備 用 其 中20 粒 進(jìn) 行 種 子 表 面 帶 菌 量 檢 測(cè) 將 種 子 分 別 浸 泡 于 裝 有 20 mL 無(wú) 菌 水 的 錐 形 瓶 中 加 入 2 3 滴 吐 溫 20 封 口 后 放 置 于4 冰 箱24h 取 上 述 種 子 浸 泡 液20 L 涂 布 于 含 有15mg L 1 氨 芐 青 霉 素 的KB 固 體 培 養(yǎng) 基 中 28 培 養(yǎng)48h 后 統(tǒng) 計(jì) 菌 落 量 每 個(gè) 處 理3 次 重 復(fù) 取30 粒 種 子 進(jìn) 行 發(fā) 芽 試 驗(yàn) 每10 粒 為1 次 重 復(fù) 將 種 子 放 于9mm 培 養(yǎng) 皿 內(nèi) 的 濕 潤(rùn) 濾 紙 上 濾 紙 下 面 放 適 量 干 凈 的 白 沙 用 于 保 濕 并 在 種 子 上 加 蓋 一 層 濕 潤(rùn) 的 濾 紙 放 入28 恒 溫 培 養(yǎng) 箱 黑 暗 培 養(yǎng) 每 12 h 加 水 1 次 保 證 種 子 濕 潤(rùn) 每 隔 24 h 拍 照 統(tǒng) 計(jì) 3d 揭 掉 表 面 覆 蓋 的 濾 紙 并 統(tǒng) 計(jì) 發(fā) 芽 勢(shì) 5d 測(cè)定根長(zhǎng)計(jì)算活力指數(shù) 7d 測(cè)定發(fā)芽率 測(cè) 定 公 式 1 種 子 表 面 菌 落 量 測(cè) 定 N 代 表 每 個(gè)培養(yǎng)皿上的菌落個(gè)數(shù) 1 代表N 0 代表0 N 10 代表10 N 100 代表100 N 500 能看清單菌落 代表N 500 菌落連成一片 2 發(fā)芽指標(biāo)測(cè)定 發(fā)芽勢(shì) 3d 種子發(fā)芽數(shù) 供試種子數(shù) 100 發(fā)芽率 7d 發(fā)芽種子數(shù) 供試種子數(shù) 100 發(fā)芽指數(shù) Gt Dt 活力指數(shù) 發(fā)芽率 根長(zhǎng) 其中 Gt 為7d 內(nèi)每日發(fā)芽數(shù) Dt 為發(fā)芽日數(shù) 2 結(jié)果與分析 2 1 染菌種子驗(yàn)證 從 圖 1 可 看 出 接 種 4 d 后 西 瓜 表 皮 出 現(xiàn) 明 顯 病 癥 由 圖2 可 知 采 用 試 紙 條 對(duì) 染 菌 種 子 進(jìn) 行 檢 測(cè) 檢 測(cè) 樣 本 與 陽(yáng) 性 對(duì) 照 試 紙 條 的 測(cè) 試 線(xiàn) 皆 顯 示 紅 色 表明樣本上攜帶Ac 圖1 接 種 后 發(fā) 病 西 瓜 表 皮 注 1 為陰性對(duì)照 2 為陽(yáng)性對(duì)照 3 為檢測(cè)樣品 圖2 試紙條檢測(cè)結(jié)果 唐思琪 等 25 種藥劑處理對(duì)西瓜種傳細(xì)菌性果斑病菌的抑制效果 19 中 國(guó) 瓜 菜 第34 卷 試驗(yàn)研究 由 圖3 可 知 以 染 菌 種 子 液 作 為 模 板 對(duì)Ac 特 異 性 引 物WBF1 WBF2 擴(kuò) 增 出 來(lái) 的PCR 產(chǎn) 物 進(jìn) 行 瓊 脂 糖 電 泳 檢 測(cè) 結(jié) 果 顯 示 無(wú) 菌 水 對(duì) 照 無(wú) 條 帶 而 染 菌 種 子 液 均 擴(kuò) 增 到 條 帶 條 帶 大 小 為 462 bp 與 陽(yáng) 性 對(duì) 照 位 置 條 帶 大 小 一 致 表 明 種 子 表 皮 存 在 Ac 播 種 后 每 隔 5 d 觀 察 西 瓜 幼 苗 染 菌 西 瓜 種 子 的 幼 苗 子 葉 首 先 出 現(xiàn) 圓 形 暈 圈 小 點(diǎn) 真 葉 長(zhǎng) 出 后 也 出 現(xiàn) 多 個(gè) 圓 形 斑 點(diǎn) 對(duì) 照 未 發(fā) 現(xiàn) 上 述 癥 狀 取 發(fā) 病 葉 片 樣 品 進(jìn) 行 細(xì) 菌 分 離 試 驗(yàn) 證 明 確 為 Ac 圖 4 注 左圖為發(fā)病西瓜葉面 右圖為健康西瓜葉面 圖4 發(fā)病西瓜與健康西瓜葉片比較 注 M 為Marker 泳 道1 為 無(wú) 菌 水 對(duì) 照 泳 道2 為 陽(yáng) 性 對(duì) 照 泳 道3 13 為染菌種子液模板條帶 圖3 染菌種子電泳結(jié)果 綜 上 所 述 分 別 用 試 紙 條 法 PCR 擴(kuò) 增 法 苗 期 觀 察 法 確 定 了 采 用 針 刺 法 接 種 病 原 菌 于 健 康 西 瓜 可以模擬自然侵染環(huán)境 獲得帶菌的西瓜種子 2 2 不同藥劑的平板抑菌效果 由 表2 可 知 在 平 板 抑 菌 篩 查 試 驗(yàn) 中 72 鏈 霉 素WP 46 氫 氧 化 銅WG 枯 草 芽 孢 桿 菌 第 一 細(xì) AS 地 衣 芽 孢 桿 菌 DP 50 多 抗 喹 啉 銅 WP 20 嗎 胍 乙 酸 銅 WP 47 春 雷 王 銅 WP 45 精 甲 霜 靈 王 銅 WP 20 噻 菌 銅 SC 20 噻 唑 鋅 SC 30 噻 唑 鋅 SC 和 20 噻 森 銅 SC 等 12 種 藥 劑 的 平 均 抑菌圈直徑 均為5mm 與CK 相同 為無(wú)效抑菌 圈 表 明 這 12 種 殺 菌 劑 在 試 驗(yàn) 條 件 下 對(duì) Ac 完 全 沒(méi) 有 抑 制 效 果 解 淀 粉 芽 孢 桿 菌 DP 枯 草 芽 孢 桿 菌 DP 40 喹 啉 銅 SC 15 惡 霉 靈 AS 50 氯 溴 異 氰 尿 酸SP 等5 種 藥 劑 對(duì)Ac 有 較 小 的 抑 制 效 果 最 高 濃 度 的 平 均 抑 菌 圈 直 徑 均 小 于10mm 隨 著 供 試 濃 度 的 降 低 抑 菌 效 果 逐 漸 消 失 8 春 雷 噻 霉 酮 WG 殺 菌 劑 1 號(hào) AS 3 噻 霉 酮 WP 0 3 四 霉 素 AS 5 春 雷 中 生 WP 25 寡 糖 乙 蒜 素 ME 80 乙 蒜 素EC 和 熒 光 假 單 胞 桿 菌DP 等8 種 藥 劑 隨 著 藥 劑 濃 度 的 增 加 平 均 抑 菌 圈 直 徑 呈 現(xiàn) 正 增 長(zhǎng) 最 高濃度的平均抑菌圈直徑均大于10mm 由 表 3 可 知 篩 選 出 平 均 抑 菌 圈 直 徑 大 于 10mm 的 有 效 藥 劑 及 其 濃 度 即 質(zhì) 量 濃 度 下 同 為 80 000 mg L 1 的 8 春 雷 噻 霉 酮 WG 5000 2500 1250mg L 1 的 殺 菌 劑1 號(hào)AS 300 150mg L 1 的 3 噻 霉 酮 WP 3000 1500 mg L 1 的 0 3 四 霉 素 AS 50000 25000mg L 1 的5 春 雷 中 生WP 2000 mg L 1 的 25 寡 糖 乙 蒜 素 ME 100 000 50000mg L 1 的80 乙 蒜 素EC 和10 10 6 40 10 5 20 10 5 mg L 1 的 熒 光 假 單 胞 桿 菌DP 將 此8 種 有 效 藥 劑 及 其 供 試 濃 度 和 清 水 對(duì) 照 進(jìn) 行 鄧 肯 分 析 可 知 此 8 種 藥 劑 對(duì) Ac 的 抑 菌 效 果 均 與 對(duì) 照 達(dá) 到 顯 著 差 異 水 平 其 中 5000 mg L 1 殺 菌 劑 1 號(hào) AS 抑 菌 效 果 最 好 其 次 是10 10 6 mg L 1 熒 光 假 單 胞 桿 菌DP 2 3 不同藥劑處理西瓜染菌種子的結(jié)果 將 以 上 平 板 試 驗(yàn) 篩 選 得 到 的 抑 菌 效 果 達(dá) 到 顯 著 差 異 的8 種 藥 劑 進(jìn) 行 進(jìn) 一 步 發(fā) 芽 試 驗(yàn) 表4 剔 除 發(fā) 芽 率 為 0 的 藥 劑 篩 選 得 到 殺 菌 劑 1 號(hào) AS 20 第11 期 等 果斑病菌的抑制效果 試驗(yàn)研究 表2 不同藥劑的平板抑菌圈直徑 藥劑名稱(chēng) 40 喹啉銅SC 15 惡霉靈AS 5 春雷 中生WP 3 噻霉酮WP 25 寡糖 乙蒜素ME 50 氯溴異氰尿酸SP 熒光假單胞桿菌DP 0 3 四霉素AS 殺菌劑1 號(hào)AS 47 春雷 王銅WP 20 噻森銅SC 30 噻唑鋅SC 80 乙蒜素EC 質(zhì)量濃度 mg L 1 400000 200000 100000 5000 150000 75000 37500 18750 50000 25000 12500 6250 300 150 75 37 5 2000 1000 500 250 500000 250000 125000 62500 10 10 6 40 10 5 20 10 5 10 10 5 3000 1500 750 357 5000 2500 1250 625 470000 235000 117500 58750 200000 100000 50000 25000 300000 150000 75000 37500 100000 50000 25000 12500 平均抑菌圈直徑 mm 7 75 7 92 7 60 6 41 9 66 8 00 5 00 5 00 12 47 10 19 5 00 5 00 16 26 11 03 9 09 5 00 10 75 7 30 7 35 5 00 8 76 6 91 5 00 5 00 19 59 14 39 14 78 10 00 18 30 12 64 8 99 8 31 24 53 18 43 13 72 8 73 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 16 81 11 89 9 11 6 44 藥劑名稱(chēng) 46 氫氧化銅WG 枯草芽孢桿菌 第一細(xì) AS 枯草芽孢桿菌DP 地衣芽孢桿菌DP 解淀粉芽孢桿菌DP 50 多抗 喹啉銅WP 20 嗎胍 乙酸銅WP 72 鏈霉素WP 45 精甲霜靈 王銅 WP 20 噻菌銅SC 8 春雷 噻霉酮WG 20 噻唑鋅SC CK 質(zhì)量濃度 mg L 1 460000 230000 115000 57500 60 10 5 12 10 5 60 10 4 30 10 4 10 10 6 20 10 5 10 10 5 50 10 4 10 10 6 20 10 5 10 10 5 50 10 4 10 10 6 20 10 5 10 10 5 50 10 4 500000 250000 125000 62500 200000 100000 50000 25000 720000 360000 180000 90000 450000 225000 112500 56250 200000 100000 50000 25000 80000 40000 20000 10000 200000 100000 50000 25000 清水 平均抑菌圈直徑 mm 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 7 29 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 6 81 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 11 28 7 39 5 39 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 25 寡 糖 乙 蒜 素 ME 80 乙 蒜 素 EC 3 噻 霉 酮 WP 5 春 雷 中 生 等 5 種 藥 劑 對(duì) 西 瓜 種 子 進(jìn) 行 處 理 由 表 4 可 知 5 春 雷 中 生 WP 處 理 染 菌 種 子 后 平 板 菌 落 量 最 低 的 均 大 于 10 個(gè) 效 果 最 差 這 與 平 板 抑 菌 試 驗(yàn) 中 表 現(xiàn) 的 結(jié) 果 不 一 致 也 反 映 出 室 內(nèi) 抑 菌 試 驗(yàn) 的 局 限 性 5000 2500 1250 mg L 1 的 殺 菌 劑 1 號(hào) AS 1000 2000 mg L 1 的 25 寡 糖 乙 蒜 素 ME 100000mg L 1 的80 乙 蒜 素EC 和300 唐思琪 等 25 種藥劑處理對(duì)西瓜種傳細(xì)菌性果斑病菌的抑制效果 21 中 國(guó) 瓜 菜 第34 卷 試驗(yàn)研究 150mg L 1 的3 噻 霉 酮WP 的 平 板 菌 落 量 均 為0 這 4 種 藥 劑 及 其 有 效 濃 度 在 平 板 抑 菌 和 實(shí) 際 處 理 染 菌 種 子 中 都 表 現(xiàn) 出 較 好 的 殺 菌 效 果 在 種 子 萌 發(fā) 方 面 當(dāng)25 寡 糖 乙 蒜 素ME 的 供 試 濃 度 越 高 時(shí) 種 子 發(fā) 芽 率 就 越 低 供 試 最 高 濃 度 無(wú) 發(fā) 芽 種 子 殺 菌 劑1 號(hào)AS 對(duì) 種 子 殺 菌 效 果 最 好 但 對(duì) 種 子 萌 發(fā) 有 抑 制 與 對(duì) 照 相 比 100000mg L 1 80 乙 蒜 素 EC 處 理 種 子 后 發(fā) 芽 率 提 高22 22 活 力 指 數(shù) 提 高 100 93 300 150mg L 1 的3 噻 霉 酮WP 處 理 種 子 的 發(fā) 芽 率 與 對(duì) 照 相 比 分 別 提 高58 73 53 97 活 力 指 數(shù) 均 高 于 對(duì) 照 綜 上 所 述 高 濃 度 的 噻 霉 酮 對(duì) 細(xì) 菌 性 果 斑 病 有 明 顯 的 抑 制 效 果 同 時(shí) 對(duì) 種 子 發(fā) 芽沒(méi)有影響 反而對(duì)種子有明顯的促生效果 3 討論與結(jié)論 在 試 驗(yàn) 中 研 究 者 們 多 數(shù) 使 用 濃 度 1 10 8 3 表4 藥劑處理對(duì)西瓜染菌種子影響 藥劑名稱(chēng) 殺菌劑1 號(hào)AS 25 寡糖 乙蒜素ME 80 乙蒜素EC 3 噻霉酮WP 5 春雷 中生WP CK 質(zhì)量濃度 mg L 1 5000 0 2500 0 1250 0 625 0 2000 0 1000 0 500 0 250 0 100000 0 50000 0 25000 0 12500 0 300 0 150 0 75 0 37 5 50000 0 25000 0 12500 0 6250 0 0 0 帶菌量 發(fā)芽勢(shì) 0b 0b 10b 37ab 0b 3b 83a 97a 60ab 47ab 83a 87a 97a 93a 100a 90a 3b 0b 3b 3b 60ab 發(fā)芽率 0b 3b 40ab 43ab 0b 13b 83a 97a 77a 73a 93a 97a 100a 97a 100a 93a 17b 20b 27b 10b 63ab 發(fā)芽指數(shù) 0 00h 0 20h 3 00fh 11 00def 0 00h 1 20gh 19 33abcd 27 33a 15 75bcde 13 64cde 22 33abc 23 58ab 22 87abc 26 83a 25 00ab 23 42ab 1 33gh 1 39gh 2 17gh 0 58gh 8 92efh 活力指數(shù) 0 00c 0 00c 0 05c 0 25bc 0 00c 0 01c 1 56ab 2 83a 2 15a 0 94ab 2 03a 2 29a 3 28a 2 73a 2 94a 1 00ab 0 45abc 0 50a 0 77ab 0 25cb 1 07ab 表3 不 同 藥 劑 的 平 板 抑 菌 圈 直 徑 顯 著 性 分 析 編號(hào) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 藥劑名稱(chēng) 5 春雷 中生WP 3 噻霉酮WP 25 寡糖 乙蒜素ME 0 3 四霉素AS 殺菌劑1 號(hào) 熒光假單胞桿菌DP 80 乙蒜素EC 8 春雷 噻霉酮WG CK 質(zhì)量濃度 mg L 1 50000 25000 300 150 2000 3000 1500 5000 2500 1250 10 10 6 40 10 5 20 10 5 100000 50000 80000 0 平均抑菌圈直徑 mm 12 47hij 10 19k 16 26de 11 03ijk 10 75jk 18 30bc 12 64ghi 24 53a 18 43bc 13 72fgh 19 59b 14 39fg 14 78ef 16 81cd 11 89ijk 11 28ijk 5 00l 注 表 中 同 列 數(shù) 字 后 不 同 小 寫(xiě) 字 母 表 示 處 理 間 在0 05 水 平 差 異 顯著 下同 10 8 cfu mL 1 的 菌 液 浸 泡 種 子 1 2 h 來(lái) 制 備 染 菌 種 子 11 這 種 方 法 快 速 簡(jiǎn) 便 在 本 試 驗(yàn) 中 使 用 了 試 紙 條 法 PCR 法 幼 苗 檢 測(cè) 法 3 種 方 法 檢 測(cè) 針 刺 法 接 種 病 原 菌 于 健 康 西 瓜 中 的 侵 染 效 果 使 用 針 刺 法 接 種 西 瓜 可 以 模 擬 自 然 侵 染 環(huán) 境 使 西 瓜 表 皮 出 現(xiàn) 病 癥 造 成 果 實(shí) 內(nèi) 部 腐 爛 西 瓜 種 子 感 染 病 原 菌 由 此 表 明 針 刺 法 接 種 健 康 西 瓜 可 用 于 不 確 定 病 原 菌 是 否 有 活 性 的 情 況 3 d 左 右 即 可 觀 察 到 西 瓜 發(fā) 病 狀 況 同 時(shí) 能 夠 達(dá) 到 觀 察 病 原 菌 的 致 病 性 和 制 備 染 菌西瓜種子的目的 筆 者 采 用 室 內(nèi) 平 板 抑 菌 圈 法 比 較 了 不 同 殺 菌 劑 對(duì)Ac 的 平 板 抑 菌 效 果 與 處 理 染 菌 種 子 的 殺 菌 效 果 試 驗(yàn) 結(jié) 果 表 明 46 氫 氧 化 銅 WG 20 嗎 胍 乙 酸 銅 WP 47 春 雷 霉 素 王 銅 WP 45 精 甲 霜 22 第11 期 等 果斑病菌的抑制效果 試驗(yàn)研究 靈 王 銅 WP 20 噻 菌 銅 SC 和 20 噻 森 銅 SC 等 銅 制 劑 在 平 板 抑 菌 試 驗(yàn) 中 對(duì)Ac 沒(méi) 有 表 現(xiàn) 出 抑 菌 效 果 不 過(guò) 有 些 銅 制 劑 在 西 甜 瓜 苗 期 和 成 株 期 使 用 能 夠 起 到 一 定 防 治 作 用 12 也 有 學(xué) 者 發(fā) 現(xiàn) 納 米 級(jí) 銅 制 劑 硫 酸 銅 氫 氧 化 銅 在 一 定 濃 度 時(shí) 能 對(duì) Ac 產(chǎn) 生 抑 菌 作 用 其 中 氫 氧 化 銅 效 果 最 佳 能 夠 使 菌 體 出 現(xiàn) 孔 洞 扭 曲 變 形 等 破 損 現(xiàn) 象 13 使 用 納 米 級(jí) 原 料 或 許 是 農(nóng) 藥 制 藥 的 一 個(gè) 新 方 向 生 物 菌 型 藥 劑 地 衣 芽 孢 桿 菌 DP 枯 草 芽 孢 桿 菌 DP 抗 生 素 型 生 物 藥 劑 72 鏈 霉 素 WP 對(duì) Ac 沒(méi) 有 抑 菌 效 果 這 與 現(xiàn) 有 的 枯 草 芽 孢 桿 菌 和 鏈 霉 素 防 治 Ac 的 報(bào) 道 有 差 異 14 猜 測(cè) 是 由 于 不 同 廠 家 生 產(chǎn) 菌 株 差 異 造 成 的 通 常 在 平 板 抑 菌 試 驗(yàn) 中 不 同 生 產(chǎn) 廠 家 同 一 廠 家