37 5 989 996 中國生物防治學報 Chinese Journal of Biological Control 2021 年 10 月 收稿日期 2020 11 19 基金項目 山東省重點研發(fā)計劃 2019JZZY020608 山東省自然科學基金 ZR2019PC013 作者簡介 仇月 碩士研究生 E mail qy18864805897 通信作者 博士 副教授 E mail sdauwhy DOI 10 16409 ki 2095 039x 2021 04 014 貝萊斯芽胞桿菌 SDTB038與化學藥劑協(xié)同防治 草莓枯萎病的研究 仇 月 孫守民 李鑫榮 楊 帥 王紅艷 山東農業(yè)大學植物保護學院 泰安 271018 摘要 草莓枯萎病是設施草莓連作種植中的重大病害 本試驗通過對前期篩選到的生防菌株進行形態(tài)學觀 察 生理生化指標和分子生物學檢測 將篩選的菌株 SDTB038 鑒定為貝萊斯芽胞桿菌 Bacillus velezensis 采用菌絲生長速率法測定了 8 種化學殺菌劑對草莓枯萎病菌的毒力 其中多菌靈 苯醚甲環(huán)唑和肟菌酯室 內毒力較高 菌株 SDTB038 與化學殺菌劑協(xié)同防治的盆栽試驗表明 藥后 21 d 單 施 10 8 cfu mL SDTB038 發(fā)酵液對草莓枯萎病的防治效果為 50 66 對該病害具有明顯的防控作用 10 8 cfu mL SDTB038 發(fā)酵液分 別與 29 mg L 肟菌酯和 20 mg L 苯醚甲環(huán)唑混用 對草莓枯萎病的防治效果分別達 62 56 和 74 01 兩 組混用組合的協(xié)同作用顯著 試驗結果表明 10 8 cfu mL SDTB038 發(fā)酵液能夠減少化學藥劑的用量 提高 防治效果 推廣應用價值大 關 鍵 詞 草莓枯萎病 貝萊斯芽胞桿菌 協(xié)同防治 減量施用 中圖分類號 S476 文獻識別碼 A 文章編號 1005 9261 2021 05 0989 08 Synergistic Effects of Bacillus velezensis SDTB038 and Chemical Pesticides on Strawberry Fusarium Wilt QIU Yue SUN Shoumin LI Xinrong YANG Shuai WANG Hongyan College of Plant Protection Shandong Agricultural University Tai an 271018 China Abstract Fusarium wilt is one of the most serious diseases of strawberry An antagonistic strain screened in previous study was identified as Bacillus velezensis according to its morphological and chemical properties and the 16S rRNA and gyrB gene sequences Toxicity of eight chemical fungicides against the pathogen was tested with mycelial growth rate method The results showed that the inhibitory activities of difenoconazole and oxystrobin were higher than those of the fungicides Pot experiment demonstrated that the control efficacy of 10 8 cfu mL SDTB038 fermentation broth on strawberry Fusarium wilt was 50 66 after 21 days of application 10 8 cfu mL SDTB038 fermentation broth mixed with 29 mg L oxystrobin and 20 mg L difenoconazole had high control effect on the disease with the efficacies of 62 56 and 74 01 respectively In summary the combined use of fermentation broth and chemical fungicides could reduce the application amount of chemical fungicides improve the control efficacy which has the great potential to be applied for the disease control Key words strawberry Fusarium wilt Bacillus velezensis synergistic control reduced dose application 我國草莓栽培面積大 總產(chǎn)量高 1 近年來 隨著草莓的種植面積 逐漸擴大 草莓枯萎病等病害危害 加重 草莓枯萎病是由尖孢鐮刀菌 Fusarium oxysporum f sp fragariae ?；颓秩揪S管束而導致的系統(tǒng)性土 傳病害 2 在苗期或開花至收獲期發(fā)病 鐮刀菌的防治策略通常依賴于培育無病植株和施用土壤熏蒸劑 990 中 國 生 物 防 治 學 報 第 37 卷 但是 培育無病植株費時費力 土壤熏蒸成本較高且常造成環(huán)境破壞等問題 化學殺菌劑對草莓枯萎病防 效較高 但常伴隨著環(huán)境污染 食品安全等問題 3 植物根際促生菌 plant growth promoting rhizobacteria PGPR 被認為能夠有效減少化學肥料投入 4 改 善土壤質量并增加農作物產(chǎn)量 5 目前 已經(jīng)有許多生防菌被報道 如蘇云金芽胞桿菌 Bacillus thuringiensis 6 解淀粉芽胞桿菌 Bacillus amyloliquefaciens 7 甲基營養(yǎng)型芽胞桿菌 Bacillus methylotrophicus 8 枯草芽胞桿 菌 Bacillus subtilis 9 和多粘類芽胞桿菌 Paenibacillus polymyxa 10 生防制劑由于其環(huán)保 安全 方便的特點 逐漸被廣大農民接受 與化學藥劑協(xié)同使用也具有廣泛的應用前景 生物防治符合我國植物病蟲害綠色防 控的理念 為植物病害防治提供了新方向 貝萊斯芽胞桿菌 Bacillus velezensis 作為一類重要的生物防治資源 11 可以產(chǎn)生次生代謝產(chǎn)物 對多種 真菌和細菌有較高的抑制活性 在農業(yè)生產(chǎn)中具有廣闊的市場前景 12 目前 尚無貝萊斯芽胞桿菌防治草 莓枯萎病的相關報道及產(chǎn)品登記 本研究采用課題組分離的貝萊斯芽胞桿菌 與化學藥劑聯(lián)合使用 驗證 其協(xié)同防治效果 評價生防菌 SDTB038 對草莓枯萎病的防控效果 研究結果將為利用貝萊斯芽胞桿菌防 治植物病害和后續(xù)微生態(tài)制劑的制備奠定理論基礎 同時為生物防治提供技術支撐 1 材料與方法 1 1 試驗材料 多菌靈 己唑醇 吡唑醚菌酯 苯醚甲環(huán)唑 百菌清 肟菌酯 嘧霉胺和氟醚菌酰胺原藥由山東農業(yè) 大學農藥環(huán)境毒理研究中心提供 草莓枯萎病病原菌尖孢鐮刀菌?；?2 菌株 SDTB038 由山東農業(yè)大學 農藥毒理與應用技術實驗室提供 PDA 培養(yǎng)基 200 g 馬鈴薯 20 g 葡萄糖 20 g 瓊脂和 1 L 去離子水 121 滅菌 30 min LB 培養(yǎng)基 1 L 去離子水 10 g 胰蛋白胨 10 g NaCl 5 g 酵母粉 20 g 瓊脂粉 121 滅菌 30 min 盆栽試驗所用草莓品種為妙香 由泰安市岱岳區(qū)房村鎮(zhèn)種苗供貨商提供 1 2 菌株 SDTB038 的鑒定 形態(tài)學鑒定 觀察菌株 SDTB038 在 LB 培養(yǎng)基中的形態(tài)特征 使用透射電鏡 JEM 1400 plus 拍照觀察 SDTB038 細胞形態(tài) 生理生化鑒定 參考 常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊 13 的方法 測試的生理生化指標包括革蘭氏染色 對 不同種類碳源 氮源能否單一利用 硝酸鹽還原反應 甲基紅反應 V P 反應等 試驗試劑由南京諾唯贊 生物科技有限公司 Nanjing Vazyme Biotech Co Ltd 提供 分子生物學鑒定 使用引物擴增菌株 SDTB038 的 16S rRNA 和 gyrB 基因序列 14 交由生工生物工程 上海 股份有限公司 Angon Biotech Shanghai Co Ltd 測序 測序結果通過 NCBI 數(shù)據(jù)庫進行比對 并用 MEGA 7 0 軟件采用鄰接法構建系統(tǒng)發(fā)育樹 1 3 菌株 SDTB038 平皿對峙試驗 采用平板對峙法 12 測定菌株 SDTB038 對草莓枯萎病菌的抑菌效果 將培養(yǎng) 5 d 的草莓枯萎病菌用打 孔器打取菌餅 放置于培養(yǎng)皿中央 將 1 L 10 8 cfu mL 菌液接種于菌餅兩側 25 黑暗培養(yǎng) 5 d 后觀察 試驗結果 1 4 室內毒力測定試驗 采用菌絲生長速率法 15 測定殺菌劑對草莓枯萎病菌的室內毒力 藥劑設計以下濃度梯度 表 1 所 選藥劑除多菌靈用少量乙酸溶解外 其他藥劑均用少量丙酮溶解 然后用滅菌水配制成 1 10 4 mg L 母液 備用 并設置溶劑對照 25 黑暗條件下倒置培養(yǎng) 5 d 后觀察試驗結果 生長抑制率 對照菌落 直徑 處理菌落直徑 對照菌落直徑 菌餅直徑 100 1 5 生防菌和化學藥劑對病原菌菌絲形態(tài)的影響 參照 1 3 的方法 將病原菌在 PDA 平板對峙培養(yǎng) 5 d 從距離 SDTB038 最近的邊緣部位用無菌刀片切 取長為 5 mm 的菌塊 參照 1 4 的方法分別制作含肟菌酯和苯醚甲環(huán)唑的 PDA 平板 倒置培養(yǎng) 5 d 后 用 無菌刀片從菌落邊緣切取長為 5 mm 的菌塊 樣品經(jīng)戊二醛和乙酸雙重固定 乙醇系列脫水 并用離子濺 射鍍金后放入觀察倉進行觀察 第 5 期 仇月等 貝萊斯芽胞桿菌 SDTB038 與化學藥劑協(xié)同防治草莓枯萎病的研究 991 表 1 藥劑濃度設置 Table 1 Pesticide concentration settings 原藥 Original drug 含量 Content 有效成分設計濃度 Design concentration of active ingredient 多菌靈 carbendazim 98 00 0 05 0 1 0 2 0 4 0 8 1 6 mg L 己唑醇 hexaconazole 95 40 0 5 1 0 2 0 4 0 8 0 16 0 mg L 吡唑醚菌酯 pyraclostrobin 97 00 0 5 1 0 2 0 4 0 8 0 16 0 mg L 苯醚甲環(huán)唑 difenoconazole 96 80 0 05 0 1 0 2 0 4 0 8 1 6 mg L 百菌清 chlorothalonil 75 00 0 5 1 0 2 0 4 0 8 0 16 0 mg L 肟菌酯 oxystrobin 97 50 0 25 0 5 1 0 2 0 4 0 8 0 mg L 嘧霉胺 pyrimethanil 98 00 5 10 20 40 60 80 mg L 氟醚菌酰胺 fluopimomide 98 00 5 10 20 40 60 80 mg L 1 6 貝萊斯芽胞桿菌 SDTB038 與化學藥劑相容性試驗 制成含有肟菌酯和苯醚甲環(huán)唑的 LB 平板 肟菌酯的濃度設置為 10 30 60 和 90 mg L 苯醚甲環(huán)唑 的濃度設置為 25 50 75 和 100 mg L 挑取 SDTB038 單菌落于液體 LB 培養(yǎng)基中恒溫過夜培養(yǎng)獲得種子 液 將種子液以 1 的接種量接種于液體 LB 中 35 180 r min 振蕩培養(yǎng) 12 h 用滅菌 LB 將發(fā)酵液濃 度稀釋到 10 6 每個含藥平板涂布 100 L 稀釋后的發(fā)酵液 以不含藥劑的 LB 平板作空白對照 以含氨芐 的 LB 平板作藥劑對照 每個處理設 3 個重復 在 35 恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 12 h 記錄單菌落數(shù) 1 7 貝萊斯芽胞桿菌 SDTB038 與藥劑混用協(xié)同防治草莓枯萎病 將健康的 長勢一致的 2 葉 1 心的草莓幼苗移栽于盛有 121 高壓滅菌 30 min 的無菌土的 150 mm 130 mm 花盆中 每盆 1 棵草莓苗 試驗共設 8 個處理 A 80 多菌靈可濕性粉劑作為藥劑對照 無菌水 配制成 350 mg L 每株噴施 10 mL B SDTB038 發(fā)酵液 10 8 cfu mL 每株灌根處理 30 mL C 40 的苯醚 甲環(huán)唑懸浮劑 無菌水配制成 20 mg L 每株噴施 10 mL D 40 的苯醚甲環(huán)唑懸浮劑 無菌水配制成 40 mg L 每株噴施 10 mL E 20 mg L 苯醚甲環(huán)唑 每株噴施 10 mL 并使用 30 mL SDTB038 發(fā)酵液 10 8 cfu mL 灌根 F 50 的肟菌酯水分散粒劑 無菌水配制成 29 mg L 每株噴施 10 mL G 50 的肟菌酯水分散粒劑 無菌水配制成 42 mg L 每株噴施 10 mL H 29 mg L 肟菌酯 每株噴 10 mL 并使用 30 mL SDTB038 發(fā) 酵液 10 8 cfu mL 灌根 發(fā)酵液施用方法為灌根處理 SDTB038 菌液濃度為 10 8 cfu mL 化學藥劑在灌根后 進行噴霧處理 著重噴施根莖部位 每個處理設 5 個重復 以滅菌水處理作為陰性對照 草莓枯萎病的病 情分級標準以葉片為單位 分為 5 級 15 0 級 無癥狀 1 級 病株有 1 4 以下的葉片出現(xiàn)萎蔫狀 2 級 有 1 4 1 2 的葉片出現(xiàn)萎蔫狀 3 級 有 1 2 以上的葉片出現(xiàn)萎蔫狀 4 級 病株死亡或接近死亡 分別于 藥后處理 7 14 和 21 d 調查病情指數(shù)并計算防治效果 病情指數(shù) 各級病葉數(shù) 代表數(shù)值 調查總 葉數(shù) 最高病級值 100 防治效果 對照病情指數(shù) 處理病情指數(shù) 對照病情指數(shù) 100 1 8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析 利用 SPSS 和 Excel 軟件 采用 Duncan 氏新復極差法進行差異顯著性檢驗 2 結果與分析 2 1 菌株 SDTB038 的鑒定 菌株 SDTB038 的菌落在 LB 培養(yǎng)基上 圖 1 呈乳白色 凸起 且有規(guī)則的邊緣 生理生化結果 表 2 顯示菌株 SDTB038 為革蘭氏陽性細菌 不 能夠利用丙二酸 不能夠產(chǎn)生硫化氫氣體和熒光色 素 透射電鏡 圖 2 結果顯示 SDTB038 細胞為桿 狀 有厚厚的莢膜 且周生鞭毛 根據(jù)形態(tài)學及生 理生化特征 對照細菌鑒定手冊和相關文獻 初步 將菌株 SDTB038 鑒定為芽胞桿菌 12 16 圖 1 菌株 SDTB038 菌落形態(tài) Fig 1 Colony morphology of strain SDTB038 992 中 國 生 物 防 治 學 報 第 37 卷 表 2 菌株 SDTB038 生理生化指標 Table 2 Physiological and biochemical indexes of strain SDTB038 項目指標 Project indicators 結果 Result 項目指標 Project indicators 結果 Result 革蘭氏染色 Gram stain 厭氧生長 Anaerobic growth 甲基紅 Methyl red 硝酸鹽還原 Nitrate reduction V P 測定 Voges Proskauer test 明膠水解 Gelatin liquefaction 吲哚試驗 Indole test 膿青素 Pyocyanin 檸檬酸利用 Citric acid utilization 丙二酸利用率 Malonate utilization 接觸酶 Contact enzyme 硫化氫氣體 Hydrogen sulfide gas 淀粉水解 Amylohydrolysis test 熒光色素產(chǎn)生 Fluorescent pigment production 注 表示陽性 表示陰性 Note indicated positive indicated negative 圖 2 25000 透射電鏡菌株 SDTB038 細胞形態(tài) Fig 2 The morphology of strain SDTB038 cell in 25000 transmission electron microscope 菌株 SDTB038 的 16S rRNA 圖 3 和 gyrB 圖 4 基因系統(tǒng)發(fā)育樹結果顯示 SDTB038 與貝萊斯芽 胞桿菌有 90 以上一致性 通過上述試驗結果 將 菌株 SDTB038 鑒定為貝萊斯芽胞桿菌 2 2 貝萊斯芽胞桿菌 SDTB038 的抑菌效果 貝萊斯芽胞桿菌 SDTB038 對草莓枯萎病菌有 抑制作用 圖 5 2 3 室內毒力測定試驗 8 種不同作用機制殺菌劑對草莓枯萎病菌毒力 測定結果 表 3 表明 多菌靈 己唑醇 吡唑醚 圖 3 菌株 SDTB038 的 16S rRNA 基因系統(tǒng)發(fā)育樹 Fig 3 The phylogenetic tree of strain SDTB038 16S rRNA sequence 菌酯 苯醚甲環(huán)唑 百菌清 肟菌酯 嘧霉胺和氟醚菌酰胺的 EC 50 值分別為 0 133 4 373 6 729 0 639 3 512 1 949 22 570 和 18 137 mg L 其中多菌靈 苯醚甲環(huán)唑和肟菌酯的毒力更高 應為備選的高效 藥劑 2 4 生防菌和化學藥劑對病原菌菌絲形態(tài)的影響 從圖 6 可以看出 SDTB038 處理后的草莓枯萎病菌的菌絲表面有大量細菌包被 圖 6B 病原菌生 長受到明顯的抑制 肟菌酯處理后的菌絲表面有明顯的凹陷 圖 6C 苯醚甲環(huán)唑處理后的菌絲在形態(tài) 上發(fā)生分支 圖 6D 第 5 期 仇月等 貝萊斯芽胞桿菌 SDTB038 與化學藥劑協(xié)同防治草莓枯萎病的研究 993 SDTB038 B velezensis BCRC 17467 DQ903176 B mojavensis BCRC 17531 DQ309303 B subtilis DY3 KY315728 B sonorensis KLBC GS 3 MN718425 B axarquiensis GS3 JQ966541 B malacitensis T 17 KP203811 B atrophaeus BCRC 17530 DQ309302 B stratosphericus MCCC 1A08156 JX680215 B altitudinis MTCC 7304 KM055075 B safensis MCCC 1A08155 JX680211 B cereus IMSNU 11014 AY265513 B thuringiensis KS KC737849 B pumilus SB6 KR092180 B amyloliquefaciens SS ZC 26 MN262479 73 79 98 99 96 86 0 50 圖 4 菌株 SDTB038 的 gyrB 基因系統(tǒng)發(fā)育樹 Fig 4 The phylogenetic tree of strain SDTB038 gyrB gene sequence AB A SDTB038 拮抗草莓枯萎病菌 SDTB038 against F oxysporum B 對照組病原菌 CK 圖 5 菌株 SDTB038 對草莓枯萎病菌的抑制效果 Fig 5 Inhibitory effect of the strain SDTB038 on F oxysporum 表 3 殺菌劑對草莓枯萎病的室內毒力 Table 3 Indoor toxicity of fungicides against F oxysporum 殺菌劑 Fungicide 回歸方程 Regression equation 相關系數(shù) Correlation coefficient EC 50 mg L 95 置信區(qū)間 Confidence interval mg L 多菌靈 Carbendazim Y 0 676X 0 591 0 902 0 133 0 032 0 431 己唑醇 Hexaconazole Y 0 529X 0 339 0 970 4 373 1 214 10 753 吡唑醚菌酯 Pyraclostrobin Y 0 423X 0 350 0 963 6 729 1 420 16 233 苯醚甲環(huán)唑 Difenoconazole Y 0 577X 0 111 0 949 0 639 0 174 2 344 百菌清 Chlorothalonil Y 0 644X 0 351 0 962 3 512 0 858 14 286 肟菌酯 Oxystrobin Y 0 476X 0 138 0 937 1 949 0 447 6 829 嘧霉胺 Pyrimethanil Y 1 074X 1 454 0 964 22 570 10 351 55 328 氟醚菌酰胺 Fluopimomide Y 1 578X 1 986 0 987 18 137 10 137 31 140 A 對照組真菌 CK B 經(jīng) SDTB038 處理的草莓枯萎病菌 SDTB038 against F oxysporum C 經(jīng)肟菌酯處理的草莓枯萎病菌 Trifloxystrobin against F oxysporum D 經(jīng)苯醚甲環(huán)唑處理的草莓枯萎病菌 Difenoconazole against F oxysporum 圖 6 20000 倍掃描電鏡圖 Fig 6 20000 scanning electron microscope 994 中 國 生 物 防 治 學 報 第 37 卷 2 5 相容性試驗 相容性試驗結果 表 4 表明 貝萊斯芽胞桿菌 SDTB038 分別能夠在 10 30 60 90 mg L 肟菌酯和 25 50 75 100 mg L 苯醚甲環(huán)唑的含藥平板上正常生長 含藥平板中的菌落數(shù)目與空白對照相比沒有明 顯差異 且菌落生長形態(tài)與對照生長一致 表 4 菌株 SDTB038 與化學藥劑相容性試驗 Table 4 Compatibility test of strain SDTB038 and chemical pesticides 處理 Treatment SDTB038 的菌落數(shù) The number of colonies of SDTB038 10 7 cfu mL 處理 Treatment SDTB038 的菌落數(shù) The number of colonies of SDTB038 10 7 cfu mL 0 05 mg L 氨芐 Ampicillin 0 00 0 00 b 對照 CK 621 67 17 34 a 10 mg L 肟菌酯 Oxystrobin 638 00 35 50 a 25 mg L 苯醚甲環(huán)唑 Difenoconazole 553 33 7 84 a 30 mg L 肟菌酯 Oxystrobin 633 00 41 36 a 50 mg L 苯醚甲環(huán)唑 Difenoconazole 604 00 29 37 a 60 mg L 肟菌酯 Oxystrobin 603 33 18 02 a 75 mg L 苯醚甲環(huán)唑 Difenoconazole 586 67 34 69 a 90 mg L 肟菌酯 Oxystrobin 587 00 16 77 a 100 mg L 苯醚甲環(huán)唑 Difenoconazole 597 33 21 15 a 2 6 貝萊斯芽胞桿菌 SDTB038 與化學藥劑協(xié)同防治草莓枯萎病的溫室試驗 表 5 結果表明 化學殺菌劑苯醚甲環(huán)唑 肟菌酯分別與貝萊斯芽胞桿菌 SDTB038 聯(lián)用對草莓枯萎病有 較好的防治效果 施藥后 7 d SDTB038 發(fā)酵液處理的防效最低 僅為 13 38 單獨使用化學殺菌劑 40 mg L 苯醚甲環(huán)唑的防效最高 為 56 36 其次為 20 mg L 苯醚甲環(huán)唑與生防菌發(fā)酵液聯(lián)用的防效 為 51 17 并與對照藥劑 350 mg L 多菌靈處理 49 79 的防效相當 再次分別為 42 mg L 肟菌酯處理 43 01 的防 效及 29 mg L 肟菌酯與生防菌發(fā)酵液聯(lián)用 40 94 的防效 P 0 05 藥后 14 d 所有處理的防效均繼續(xù)提高 其中防效最高的處理為施用 40 mg L 苯醚甲環(huán)唑處理的防效 以及 20 mg L 苯醚甲環(huán)唑與生防菌發(fā)酵液聯(lián)用處理的防效 分別為 70 52 和 69 48 兩處理防效相當 且顯著高于多菌靈處理的防效 42 mg L 肟菌酯處理的防效及 29 mg L 肟菌酯與生防菌發(fā)酵液聯(lián)用的防效 均與對照藥劑多菌靈處理的防效相當 P 0 05 藥后 21 d 兩種殺菌劑與生防菌聯(lián)用處理的防效仍有明顯提高 持效性較好 20 mg L 苯醚甲環(huán)唑與 生防菌聯(lián)用的防效達 74 01 29 mg L 肟菌酯與生防菌發(fā)酵液聯(lián)用的防效為 62 5 均顯著高于對照藥劑 多菌靈的防效 P 0 05 表 5 貝萊斯芽胞桿菌 SDTB038 與化學藥劑協(xié)同防治草莓枯萎病的溫室試驗防治效果 Table 5 Effect of the combination of Fungicide and Bacillus velezensis SDTB038 10 8 cfu mL on strawberry Fusarium wilt in greenhouse 藥后 7 d 藥后 14 d 藥后 21 d 處理 Treatment 病情指數(shù) Disease index 防治效果 Control effect 病情指數(shù) Disease index 防治效果 Control effect 病情指數(shù) Disease index 防治效果 Control effect 陰性對照 CK 39 69 63 33 75 67 80 多菌靈 Carbendazim 350 mg L 19 93 49 79 b 23 33 63 16 bc 34 00 55 07 d SDTB038 10 8 cfu mL 34 38 13 38 g 36 67 42 10 d 37 33 50 67 e 40 苯醚甲環(huán)唑 Difenoconazole 20 mg L 25 94 35 17 e 33 67 46 83 d 30 67 59 47 c 40 苯醚甲環(huán)唑 Difenoconazole 40 mg L 17 32 56 36 a 19 33 69 48 a 13 00 82 82 a 40 苯醚甲環(huán)唑 Difenoconazole 20 mg L SDTB038 10 8 cfu mL 19 38 51 17 b 18 67 70 52 a 19 67 74 01 b 50 肟菌酯 Oxystrobin 29 mg L 29 06 26 78 f 33 67 46 83 d 40 67 46 25 f 50 肟菌酯 Oxystrobin 42 mg L 22 62 43 01 c 21 33 66 32 ab 18 33 75 77 b 50 肟菌酯 Oxystrobin 29 mg L SDTB038 10 8 cfu mL 23 44 40 94 d 26 33 58 42 c 28 33 62 56 c 第 5 期 仇月等 貝萊斯芽胞桿菌 SDTB038 與化學藥劑協(xié)同防治草莓枯萎病的研究 995 3 討論 芽胞桿菌是一種重要的生物資源 是最廣泛使用的生物防治劑之一 其生防機理主要有抗生 競爭 促生及誘導抗性 ISR 等 17 本試驗通過形態(tài)觀察 生理生化試驗和分子鑒定手段將實驗室前期分離得 到的菌株 SDTB038 鑒定為貝萊斯芽胞桿菌 貝萊斯芽胞桿菌是一種環(huán)境友好的拮抗芽胞桿菌 由于其能 促進植物生長 有效抑制農業(yè)生產(chǎn)中的多種植物病原菌 防治疫霉菌 茄子根瘤菌和尖鐮孢菌等引起的植 物病害 已被廣泛應用于生物防治 18 王雨等 19 報道了貝萊斯芽胞桿菌 HN 2 對杧果炭疽菌有較好抑菌作 用的 李生樟等 20 分離鑒定了貝萊斯芽胞桿菌 504 對黃單胞菌屬的細菌具有較好的抑菌活性 王偉等 21 報道菌株 X 75 對番茄灰霉病菌灰葡萄孢菌具有明顯的拮抗作用 本研究不僅測定了貝萊斯芽胞桿菌 SDTB038 對草莓枯萎病菌的抑菌活性 還測定了 SDTB038 與化學藥劑聯(lián)合施用的盆栽防治效果 結果顯 示 SDTB038 菌株在草莓枯萎病防治中具有良好的應用前景 生物防治對人畜安全 環(huán)境友好且不易引發(fā)抗藥性 21 22 受到國內外學者關注 但因其田間效果不穩(wěn) 定 藥效發(fā)揮慢 田間防效差等不足嚴重制約了生防制劑的推廣應用 23 24 研究表明 化學藥劑能幫助生 防菌克服包括病原菌在內的習居微生物的排斥作用 利于其在土壤中順利定殖生存進而成為優(yōu)勢種群 從 而發(fā)揮生物防治作用 25 27 本研究通過室內毒力測定從 8 種化學藥劑中篩選出了抑菌效果良好的苯醚甲環(huán) 唑和肟菌酯 且生物相容性試驗結果顯示 SDTB038 與苯醚甲環(huán)唑 肟菌酯相容性較好 SDTB038 在藥 劑含量為 100 mg L 的平板上仍能正常生長 盆栽試驗結果表明 藥后 21 d 29 mg L 肟菌酯與 SDTB038 協(xié)同防治效果為 62 56 20 mg L 苯醚甲環(huán)唑與 SDTB038 協(xié)同防治效果為 74 01 顯著高于生防菌及同 劑量化學藥劑單獨施用的防治效果 與 42 mg L 肟菌酯 40 mg L 苯醚甲環(huán)唑的防治效果 75 77 和 82 82 相近 目前 已有報道證實解淀粉芽胞桿菌與氟啶胺復配對草莓灰霉病的防效達 70 21 25 枯草芽胞桿 菌與吡唑醚菌酯混用對草莓枯萎病的防效為 72 42 92 11 28 但關于貝萊斯芽胞桿菌與化學藥劑聯(lián)合 施用的報道較少 因此 探索 SDTB038 與化學藥劑協(xié)同防治草莓枯萎病具有重要意義 本研究證實貝萊斯芽胞桿菌 SDTB038 發(fā)酵液與化學藥劑聯(lián)用對草莓枯萎病有較好的防治效果 能夠 減少化學藥劑肟菌酯和苯醚甲環(huán)唑的用量 也會顯著降低化學農藥在草莓上的殘留量 對草莓綠色生產(chǎn)中 降低農藥殘留量 保護農業(yè)生態(tài)環(huán)境 實現(xiàn)健康栽培和保障農產(chǎn)品質量安全意義重大 但本試驗僅在盆栽 試驗中進行了防效驗證 其實際防治效果仍需要進行田間試驗 貝萊斯芽胞桿菌 SDTB038 具有較高的研 究和應用價值 有潛力將其開發(fā)為一種生物農藥或微生態(tài)制劑 本研究將為防治植物病害和后續(xù)微生態(tài)制 劑的制備奠定理論基礎 同時為生物防治提供技術支撐 參 考 文 獻 1 陳道 丁新倫 張潔 等 福建省六種草莓病毒的分子檢測 J 植物保護學報 2018 45 6 1433 1434 2 姜莉莉 王紅艷 夏曉明 等 草莓枯萎病菌抗戊唑醇突變體 ZY W 的生理生化特性 J 農藥學學報 2012 14 1 42 50 3 林琪童 楊麗榮 夏明聰 等 小麥莖基腐病生防菌株 YB 161 的分離鑒定及防效測定 J 植物保護學報 2020 47 4 939 948 4 孫韻雅 陳佳 王悅 等 根際促生菌促生機理及其增強植物抗逆性研究進展 J 草地學報 2020 28 5 1203 1215 5 Ma M Jiang X Wang Q et al Isolation and identification of PGPR strain and its effect on soybean growth and soil bacterial community composition J International Journal of Agriculture and Biology 2018 20 6 1289 1297 6 劉華梅 胡虓 王應龍 等 對草地貪夜蛾高毒力的蘇云金桿菌菌株篩選 J 中國生物防治學報 2019 35 5 721 728 7 王寶 楊揚 蔡吉苗 等 內生解淀粉芽胞桿菌 BEB33 脂肽類化合物分析及對香蕉枯萎病菌拮抗作用研究 J 中國生物防治學報 2019 35 5 785 792 8 Cheng X Ji X Ge Y et al Characterization of antagonistic Bacillus methylotrophicus isolated from rhizosphere and its biocontrol effects on maize stalk rot J Phytopathology 2018 109 4 571 581 9 武君潔 吳毅歆 何鵬搏 等 枯草芽胞桿菌 YN2014090 懸浮劑的研制 J 中國生物防治學報 2019 35 5 777 784 10 黃藝爍 謝學文 石延霞 等 多粘類芽胞桿菌 ZF197 對白菜莖基腐病防治效果 J 園藝學報 2020 47 6 1059 1071 11 何偉 羅文芳 許建軍 等 貝萊斯芽胞桿菌 JTB8 2 的篩選 鑒定及其對瓜列當拮抗作用研究 J 中國生物防治學報 2020 36 5 786 794 996 中 國 生 物 防 治 學 報 第 37 卷 12 趙昱榕 李磊 謝學文 等 貝萊斯芽胞桿菌 ZF2 對多主棒孢病菌防治效果 J 中國生物防治學報 2019 35 2 217 225 13 東秀珠 蔡妙英 常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊 M 北京 科學出版社 2001 14 張瓊 Zabihullah S 唐燦明 貝萊斯芽孢桿菌 SZAD1 對大麗輪枝菌的生物防治效果 J 棉花學報 2020 32 4 329 338 15 顧春波 史曉斌 姜莉莉 等 草莓枯萎病菌對多菌靈的抗性及其抗性菌株生物學特性 J 植物保護學報 2010 37 3 266 272 16 沙月霞 曾慶超 王昕 等 防治稻瘟病芽胞桿菌的篩選及效果評價 J 中國生物防治學報 2018 34 3 414 422 17 許帥 謝學文 張昀 等 馬鈴薯枯萎病生防芽胞桿菌篩選及生防效果研究 J 中國生物防治學報 2020 36 5 761 770 18 Wang C Zhao D Qi G et al Effects of Bacillus velezensis FKM10 for promoting the growth of Malus hupehensis Rehd and inhibiting Fusarium verticillioides J Frontiers in Microbiology 2020 10 2889 19 王雨 譚崢 韋丹丹 等 貝萊斯芽胞桿菌 HN 2 的鑒定及對杧果炭疽菌的抑菌活性研究 J 中國生物防治學報 2020 36 2 220 230 20 李生樟 陳穎 楊瑞環(huán) 等 一株拮抗黃單胞菌的貝萊斯芽孢桿菌的分離和鑒定 J 微生物學報 2019 59 10 1969 1983 21 冶福春 馬文林 楊曉龍 枯草芽胞桿菌 Qh 618 對燕麥葉斑病防治效果研究 J 中國生物防治學報 2021 37 4 785 795 22 張濤 李雪艷 楊紅梅 等 4 株拮抗細菌對棉花黃萎病的防治效果及機制 J 中國生物防治學報 2018 34 6 882 889 23 張德濤 彭正凱 曹琦琦 等 3 株拮抗菌在水稻植株上的定殖能力及對紋枯病的防效 J 西北農林科技大學學報 自然科學版 2012 40 2 97 102 24 陳雪