9 期 畢海林等 藍(lán)莓 綠寶石 組織培養(yǎng)和快速繁殖技術(shù)研究 41 的淡季 能極好地填補我國早熟藍(lán)莓的市場 因此是 發(fā)展?jié)摿O大的早熟藍(lán)莓品種 目前 我國藍(lán)莓組 織培養(yǎng)育苗技術(shù)已經(jīng)成熟 畢海林 3 和加衛(wèi) 4 等 對野生越桔進(jìn)行了組織培養(yǎng)研究報道 前人等 5 10 對高叢藍(lán)莓 兔眼藍(lán)莓 矮叢藍(lán)莓中的部分藍(lán)莓栽培 品種進(jìn)行了組織培養(yǎng)技術(shù)的研究報道 但關(guān)于早熟 藍(lán)莓 綠寶石 組培快繁技術(shù)鮮見報道 筆者對藍(lán) 莓 綠寶石 進(jìn)行了組織培養(yǎng)技術(shù)研究 摸索出了 綠寶石 的組培快繁技術(shù) 將有力地促進(jìn)藍(lán)莓 綠 寶石 優(yōu)質(zhì)種苗的規(guī)?；a(chǎn) 推動了我國早熟藍(lán) 莓的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展 1 材料與方法 1 1 材料 藍(lán)莓栽培品種 綠寶石 枝條 取自云南省農(nóng)業(yè) 科學(xué)院高山經(jīng)濟植物研究所麗江新團(tuán)藍(lán)莓基地 1 2 方法 1 2 1 外植體選取與初代培養(yǎng) 1 2 1 1 外植體選取 選擇健壯且無病蟲害的田 間植株 分別在 2 月初取腋芽尚未萌發(fā)的 2 年生老 枝條和 4 月下旬取當(dāng)年生嫩枝條 選取大棚內(nèi)有生 長勢的幼苗頂端莖段 1 2 1 2 外植體消毒 將所取枝條剪成帶 1 2 個 腋芽或頂芽的莖段 先用洗衣粉液浸泡 5 min 然后 流水沖洗 2 h 再放入超凈工作臺 先用 70 酒精消 毒 30 s 再用 0 1 升汞溶液分別消毒 10 6 4 min 無菌水浸洗 5 次后供接種用 1 2 1 3 初代培養(yǎng) 將消毒后的 3 種外植體接種 到啟動培養(yǎng)基 WPM 1 0 mg L ZT 上 培養(yǎng)基 pH 值為 5 5 每瓶培養(yǎng)基接種 1 個莖段 以 50 個莖段 為 1 個組合 分別重復(fù) 3 次 45 d 以后統(tǒng)計其污染 率 萌發(fā)率 并測量和計算萌發(fā)新枝條的平均長度 表 1 1 2 2 繼代增殖培養(yǎng) 將初代培養(yǎng)萌發(fā)的腋芽剪 成約 1 cm 的莖段 接種到含不同激素的 8 種增殖培 養(yǎng)基上 增殖培養(yǎng)基見表 2 培養(yǎng)基 pH 值為 5 5 每 瓶接種 10 個莖段 以 10 個莖段為 1 個組合 分別重 復(fù) 3 次 60 d 后觀測苗的生長情況 并計算其增殖 系數(shù) 將繼代培養(yǎng)試管苗剪成 1 cm 的莖段 接種到同 一種 WPM 培養(yǎng)基中 每瓶接種 10 個莖段 將培養(yǎng)溫 度分別設(shè)定為 21 23 25 27 29 光強設(shè)定為 2000 lx 培養(yǎng)基 pH 值為 5 5 以 10 個莖段為 1 個組合 分 別重復(fù) 3 次 60 d 后觀測苗的生長情況 并計算其 增殖系數(shù) 表 3 1 2 3 試管內(nèi)生根培養(yǎng)及試管外扦插 1 2 3 1 試管內(nèi)生根培養(yǎng) 將試管苗剪成約 2 cm 的莖段 接種到 8 種生根培養(yǎng)基中 生根培養(yǎng)基見表 3 培養(yǎng)基 pH 值 5 5 每瓶接種 10 苗 以 10 苗為 1 個組合 分別重復(fù) 3 次 觀測記錄各培養(yǎng)基中愈傷 組織形成和生根時間 150 d 后測量根長 根數(shù) 基部 愈傷組織面積 并計算其生根率 表 4 1 2 3 2 試管外扦插 將試管苗剪去基部愈傷組 織 蘸 1000 mg L NAA 后 分別扦插在填滿 4 種基質(zhì) 的 70 孔穴盤中 4 種基質(zhì)見表 5 扦插以后放入大 棚內(nèi) 大棚上方拉一層遮陽網(wǎng) 插好苗的穴盤上方扣 上小拱棚 拱棚內(nèi)溫度控制在 32 以下 空氣濕度 保持在 80 95 觀測生根情況 以 20 苗為 1 個 組合 分別重復(fù) 3 次 150 d 后測量根數(shù) 并計算其生 根率 2 結(jié)果與分析 2 1 綠寶石 不同生理年齡的外植體初代培養(yǎng)生 長情況 由表 1 可以看出 剛?cè)氪旱?2 月初腋芽尚未萌 發(fā)的田間種植的 綠寶石 2 年生老枝條莖段 用 0 1 升汞溶液消毒 10 min 后 污染率還較高 說明 老枝條帶菌較多 較難消毒 并且沒有污染的莖段萌 發(fā)率也較低 多數(shù)腋芽萌發(fā)以后也不再伸長 一段時 間后發(fā)現(xiàn)內(nèi)部芽點變黑枯死 只有極少數(shù)萌發(fā)后開 始緩慢地伸長 4 月下旬取當(dāng)年生嫩枝莖段 雖然 消毒時間較短 但是外植體的污染率低 大部分腋芽 萌發(fā) 且萌發(fā)以后基本上能生長成幼嫩枝條 萌發(fā)的 新枝條平均長度接近 3 cm 而大棚內(nèi)有生長勢的幼 苗莖段 雖然消毒時間最短 但是外植體的污染率最 低 絕大部分腋芽能萌發(fā) 并且基本上能生長成幼嫩 枝條 萌發(fā)的新枝條平均長度達(dá)到 3 cm 最重要的 是 春季 夏季 秋季 大棚內(nèi)的 綠寶石 幼苗 生長 較旺盛 均可選取外植體 而且能結(jié)合幼苗的整形修 剪 將剪下的幼苗頂端莖段 用作組培育苗的外植體 材料 綠寶石 幼苗經(jīng)整形修剪后 能不斷萌發(fā)出 新的側(cè)枝 可進(jìn)一步將側(cè)枝剪下作為外植體材料 以 此源源不斷地獲得大量組培育苗的外植體材料 因 此 藍(lán)莓 綠寶石 組織培養(yǎng) 以大棚內(nèi)幼苗頂端莖 段為最佳外植體 2 2 綠寶石 在不同條件下的繼代增殖情況 42 江 西 農(nóng) 業(yè) 學(xué) 報 33 卷 2 2 1 不同激素配比對 綠寶石 增殖的影響 由 表 2 可以看出 培養(yǎng) 60 d 后 同時在培養(yǎng)基中添加 細(xì)胞分裂素 ZT 和生長素 NAA 苗基部均有較多淡 綠色愈傷組織形成 絕大多數(shù)接種莖段形成單苗 叢 生苗較少 增殖系數(shù)反而較低 相比較之下 較低水 平的同濃度 NAA 伴隨著 ZT 濃度的升高 苗基部的 淡綠色愈傷組織呈逐漸變小的趨勢 形成的叢生苗 反而較多 增殖系數(shù)也相對較高 在只加細(xì)胞分裂 素 ZT 的培養(yǎng)基中 苗基部形成愈傷組織不明顯 僅 僅稍微膨大 大多數(shù)接種莖段伸長的同時 基部均分 化形成較多叢生苗 僅少數(shù)為單苗 增殖系數(shù)普遍較 高 但是相比較之下 伴隨著 ZT 濃度的增高 形成的 叢生苗呈稍微減少的趨勢 但苗稍微高一點 增殖系 數(shù)略有降低 因此 在藍(lán)莓 綠寶石 增殖培養(yǎng)過程 中 較低濃度的玉米素 ZT 有利于 綠寶石 的增殖 表 1 綠寶石 不同生理年齡的外植體初代培養(yǎng)生長情況 外植體 消 毒 時 間 min 污染率 萌發(fā)率 新枝長 cm 萌發(fā)及生長情況 成苗 2 年 生老枝條 莖段 10 39 3 46 0 0 33 多數(shù)莖段腋芽會 萌發(fā) 但一段時間 后發(fā)現(xiàn)內(nèi)部芽點 變黑枯死 絕大多 數(shù)不再伸長 成苗當(dāng)年 生嫩枝條 莖段 6 25 3 80 7 2 94 大部分莖段腋芽 和頂芽均萌發(fā) 且 芽萌發(fā)以后開始 生長成幼嫩枝條 幼苗頂端 莖段 4 16 0 88 7 3 02 絕大部分莖段腋 芽和頂芽均萌發(fā) 且芽萌發(fā)以后開 始 生 長 成 幼 嫩 枝條 2 2 2 不同溫度對 綠寶石 增殖的影響 由表 3 可以看出 培養(yǎng)溫度為 21 時 綠寶石 的增殖系 數(shù)為 4 0 隨著培養(yǎng)溫度的升高 平均苗高逐漸增 高 增殖系數(shù)也同時增加 29 時苗最高 增殖系數(shù) 達(dá)到最高 增殖系數(shù)為 8 1 較高溫度 29 的增 殖系數(shù)是較低溫度 21 的 2 倍左右 在本試驗 中 最低溫和最高溫培養(yǎng)中均沒有出現(xiàn)玻璃化苗和 畸形苗 苗生長均較健壯 由此可見 在一定溫度范 圍內(nèi) 高溫有利于 綠寶石 的快速增殖 2 3 綠寶石 試管苗生根培養(yǎng) 2 3 1 不同生長素對 綠寶石 試管苗瓶內(nèi)生根培 養(yǎng)的影響 由表 4 可以看出 綠寶石 在 8 種培養(yǎng) 基中 隨著苗的逐漸長高 苗基部均出現(xiàn)黃綠色愈傷 組織 愈傷組織形成后 相當(dāng)長的一段時間內(nèi)基本沒 變化 約 3 個月后開始出現(xiàn)極少量的幼根分化 150 d 后測量根數(shù) 并計算其生根率 結(jié)果發(fā)現(xiàn) 在 8 種 培養(yǎng)基中 苗的生根率在 60 76 之間 沒生根 的苗基部愈傷組織部分少量變褐 同時添加 IBA 和 NAA 的培養(yǎng)基與僅添加 IBA 的培養(yǎng)基相比 后者苗 基部的愈傷組織要小一些 相對應(yīng)地 愈傷組織越小 的培養(yǎng)基中苗的生根率稍高 由此說明 藍(lán)莓 綠 寶石 試管內(nèi)誘導(dǎo)生根的時間極長 培養(yǎng)基中添加 較低濃度的生長素時 苗基部形成的愈傷組織越小 生根時間稍短 生根率較高 說明在藍(lán)莓 綠寶石 試管內(nèi)生根誘導(dǎo)時 較高濃度的生長素誘導(dǎo)形成較 大的愈傷組織 反而阻礙了其生根 當(dāng)培養(yǎng)基中添 加 0 5 mg L IBA 時 生根率達(dá)到 75 3 是 8 種培 養(yǎng)基中生根率最高的 因此 藍(lán)莓 綠寶石 在 WPM 0 5 mg L IBA 的培養(yǎng)基中生根率較高 但是生根 時間他很長 表 2 綠寶石 在不同激素配比條件下的增殖情況 基本 培養(yǎng)基 激素濃度 mg L ZT NAA 叢生 芽數(shù) 苗高 cm 增殖 系數(shù) 生長情況 WPM 0 5 0 1 1 03 4 08 4 2 苗基部有大塊淡綠色 愈傷組織 絕大多數(shù) 為單苗 叢生苗極少 WPM 1 0 0 1 1 16 4 22 4 9 苗基部淡綠色愈傷組 織較大 絕大多數(shù)為 單苗 叢生苗較少 WPM 1 5 0 1 1 29 4 50 5 8 苗基部淡綠色愈傷組 織較小 絕大多數(shù)為 單苗 叢生苗少 WPM 2 0 0 1 1 51 4 37 6 6 苗基部有小塊淡綠色 愈傷組織 絕大多數(shù) 為單苗 叢生苗少 WPM 0 5 0 1 71 4 85 8 3 苗基部稍微膨大 少 數(shù)為單苗 大部分形 成叢生苗 WPM 1 0 0 1 66 4 81 8 0 苗基部稍微膨大 少 數(shù)為單苗 大部分形 成叢生苗 WPM 1 5 0 1 50 5 03 7 5 苗基部稍微膨大 少 數(shù) 為 單 苗 叢 生 苗 較多 WPM 2 0 0 1 50 5 14 7 7 苗基部稍微膨大 少 數(shù)為單苗 苗較高 叢 生苗較多 表 3 不同溫度對 綠寶石 增殖的影響 培養(yǎng)溫 度 叢生 芽數(shù) 苗高 cm 增殖 系數(shù) 玻璃 化苗 畸形苗 生長情況 21 1 04 3 83 4 0 0 0 苗濃綠健壯 但生 長較緩慢 23 1 19 4 11 4 9 0 0 苗濃綠健壯 但生 長較緩慢 25 1 36 4 77 6 5 0 0 苗濃綠健壯 且生 長較快 27 1 28 5 76 7 4 0 0 苗濃綠健壯 且生 長快 29 1 34 6 04 8 1 0 0 苗濃綠健壯 且生 長很快 9 期 畢海林等 藍(lán)莓 綠寶石 組織培養(yǎng)和快速繁殖技術(shù)研究 43 表 4 不同生長素對 綠寶石 試管苗瓶內(nèi)生根培養(yǎng)的影響 基本培養(yǎng)基 激素濃度 mg L NAA IBA 根原基 形成時間 d 苗高 cm 苗基部愈傷 組織面積 cm 2 根數(shù) 條 根長 cm 生根率 1 2WPM 0 1 0 5 95 6 93 0 64 3 66 8 87 67 2 1 2WPM 0 1 1 0 102 7 07 0 68 3 71 8 34 65 8 1 2WPM 0 1 1 5 100 7 21 0 79 3 45 8 37 63 6 1 2WPM 0 1 2 0 105 7 22 0 84 3 53 7 90 61 7 1 2WPM 0 0 5 86 6 64 0 37 4 27 9 25 75 3 1 2WPM 0 1 0 91 6 78 0 44 4 08 9 13 73 7 1 2WPM 0 1 5 93 6 90 0 41 4 11 9 11 73 9 1 2WPM 0 2 0 97 7 02 0 52 3 84 8 94 71 2 2 3 2 不同基質(zhì)對 綠寶石 試管苗瓶外扦插生根 的影響 由表 5 可以看出 綠寶石 試管苗扦插在 4 種基質(zhì)中的生根情況差異較大 以鋸木屑 珍珠 巖為基質(zhì)的穴盤中 苗的生根情況較差 鋸木屑中約 3 周后才出現(xiàn)少量短根 2 個月時的生根率為 67 2 而以細(xì)沙 珍珠巖為基質(zhì)的穴盤中的苗的 生根情況最差 苗的基部很容易腐爛變黑 基部不變 黑的苗需要 1 個月左右才生根 生根率較低 草炭 土 珍珠巖 苔蘚為基質(zhì)的穴盤中苗的生根情況良 好 15 d 左右即出現(xiàn)無色的短根 一段時間后根變 白 再逐漸變黃 2 個月后統(tǒng)計觀察發(fā)現(xiàn) 除了萎蔫 的苗外 其余基本上均已長根 隨著苗逐漸長高 頂 部葉片也開始展開 由此可見 苔蘚 草炭土 珍珠 巖是 綠寶石 瓶外生根最好的扦插基質(zhì) 表 5 綠寶石 試管苗在 4 種基質(zhì)中的生根情況 基質(zhì)配方 生根時間 d 生根率 苗伸長量 cm 生根情況 鋸木屑 珍珠巖 20 1 m m 21 67 2 2 93 21 d 后部分苗基部形成無色短根 一段時間后根變白 再變 黃 苗生根后伸長較多 細(xì)沙 珍珠巖 20 1 m m 29 43 6 1 35 29 d 后少部分苗基部形成無色短根 一段時間后根變白 再變 黃 苗生根后生長緩慢 草炭土 珍珠巖 20 1 m m 15 95 5 4 07 15 d 后苗基部形成無色短根 一段時間后根變白 再變黃 苗 生根后伸長多 苔蘚 14 98 0 3 84 14 d 苗基部形成無色短根 一段時間后根變白 再變黃 苗生 根后伸長較多 3 討論與結(jié)論 組織培養(yǎng)已成為我國生產(chǎn)藍(lán)莓優(yōu)質(zhì)種苗的一種 主要方式 盡管其技術(shù)已經(jīng)較為成熟 但越桔屬不同 野生種和不同藍(lán)莓栽培品種的組培技術(shù)或多或少肯 定存在一定的差異 藍(lán)莓組培苗在試管內(nèi)生根效果 不佳 生根慢 生根率僅為 30 70 因此主要采 用試管外生根的方法 11 中國南北方氣候差異大 應(yīng)因地制宜 選擇適合 的時間 即氣溫回升但不太高時進(jìn)行試管苗扦插 目 前 生根扦插基質(zhì)主要采用苔蘚 一般在扦插半個月 左右就開始生根 生根效果好 生根率高 本試驗采 用的 2 種生根基質(zhì) 即苔蘚和草炭土 其生根效果都 很好 但比起苔蘚來 以草炭土作為生根基質(zhì) 根部 土團(tuán)容易散開 不方便運輸 只宜就近上缽管理 而 以苔蘚為基質(zhì) 生根以后 根與苔蘚很好地纏繞形成 不易散開的團(tuán)塊 方便長途運輸 且保水性好 本試驗表明 藍(lán)莓 綠寶石 組織培養(yǎng)以大棚內(nèi) 幼苗頂端莖段為最佳外植體 在增殖培養(yǎng)過程中 較 低濃度的玉米素 ZT 有利于 綠寶石 的增殖 在一 定溫度范圍內(nèi) 高溫有利于 綠寶石 的快速增殖 綠寶石 在試管內(nèi)需要很長的時間才能生根 在篩 選出的較佳生根培養(yǎng)基 1 2WPM 0 5 mg L IBA 中 的生根率僅為 75 3 苔蘚和草炭土均是 綠寶石 瓶外生根最好的扦插基質(zhì) 其中以苔蘚作為扦插基質(zhì) 時 苗生根后更方便運輸 參考文獻(xiàn) 1 楊正松 和加衛(wèi) 唐開學(xué) 等 滇西北野生藍(lán)莓資源 J 西 南農(nóng)業(yè)學(xué)報 2008 21 4 1059 1062 2 陽翠 王軍 陳昌琳 等 不同藍(lán)莓栽培品種的農(nóng)藝性狀和 品質(zhì)特性 J 南方農(nóng)業(yè)學(xué)報 2019 50 4 788 794 下轉(zhuǎn)第 48 頁 48 江 西 農(nóng) 業(yè) 學(xué) 報 33 卷 2 81 83 18 鄭秋玲 劉珅坤 崔萬鎖 等 不同樹形及花穗整形長度 對 夏黑 葡萄果實品質(zhì)的影響 J 中國農(nóng)學(xué)通報 2019 35 2 53 56 19 程大偉 陳錦永 顧紅 等 紅地球葡萄花穗整形方式研 究 J 中國農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報 2019 21 9 44 50 20 劉崇懷 沈育杰 陳俊 等 葡萄種質(zhì)資源描述規(guī)范和數(shù) 據(jù)標(biāo)準(zhǔn) M 北京 中國農(nóng)業(yè)出版社 2006 21 GB T 12456 2008 食品中總酸的測定 M 北京 中 國標(biāo)準(zhǔn)出版社 2008 22 NY T 2637 2014 水果和蔬菜可溶性固形物含量的測 定 折射儀法 M 北京 中國農(nóng)業(yè)出版社 2014 23 魯會冉 陳錦永 程大偉 等 葡萄花穗整形技術(shù)研究進(jìn) 展 J 江西農(nóng)業(yè)學(xué)報 2017 29 7 56 61 24 王玉安 張坤 朱燕芳 等 花穗整形與生長調(diào)節(jié)劑處理 對夏黑葡萄果實大小及品質(zhì)的影響 J 西北林學(xué)院學(xué) 報 2019 34 6 126 132 25 韓真 史祥賓 王海波 等 花穗修剪方式對 夏黑 葡萄 產(chǎn)量與經(jīng)濟效益的影響 J 北方園藝 2019 4 65 69 26 Hernanz D ecamales A F Mel ndez Mart nez A J et al Multivariate statistical analysis of the color anthocya nin relationships in different soilless grown strawberry genotypes J Journal of Agricultural and Food Chemis try 2008 2735 2741 27 程大偉 李正陽 顧紅 等 醉金香葡萄花穗整形方式研 究 J 江西農(nóng)業(yè)學(xué)報 2020 32 1 38 43 28 劉鑫銘 陳婷 雷龑 3 種陽光玫瑰葡萄花穗整形方式的 比較 J 中國南方果樹 2020 49 6 97 100 29 齊秀娟 李作軒 徐善坤 山楂果實中可溶性糖與果皮 色素的關(guān)系 J 果樹學(xué)報 2005 1 81 83 30 白世踐 李超 趙榮華 等 赤霉素與氯吡苯脲處理對 克瑞森 無核葡萄果實品質(zhì)的影響 J 北方園藝 2015 14 7 10 31 魯會冉 不同花穗整形方式對葡萄果實品質(zhì)的影響 D 鄭州 河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017 32 李曉紅 路文鵬 宋潤剛 等 山葡萄掐花序尖和疏果粒 增產(chǎn)效果的研究 J 北方園藝 2011 15 42 44 33 賈玥 季晨飛 余曉娟 等 不同花穗整形長度對 魏可 葡萄果實品質(zhì)的影響 J 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2014 42 11 3212 3213 34 程大偉 李正陽 顧紅 等 醉金香葡萄花穗整形方式研 究 J 江西農(nóng)業(yè)學(xué)報 2020 32 1 38 43 責(zé)任編輯 黃榮華 櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗 上接第 43 頁 3 畢海林 楊正松 楊洪濤 等 白果越橘組織培養(yǎng)和快速 繁殖技術(shù)研究 J 江西農(nóng)業(yè)學(xué)報 2018 30 5 23 27 4 和加衛(wèi) 徐中志 唐開學(xué) 等 云南越桔的組織培養(yǎng) J 植物生理學(xué)通訊 2007 43 2 320 5 劉慶忠 趙紅軍 高灌藍(lán)莓的組織培養(yǎng)及快速繁殖 J 植物生理學(xué)通訊 2002 38 3 253 6 李麗容 金開正 兔眼藍(lán)莓組培快繁試驗 J 中國南方 果樹 2010 39 1 71 72 7 張長青 李廣平 兔眼越橘莖段快繁高效技術(shù)研究 J 果樹學(xué)報 2007 6 837 840 8 龔雪元 杜亞填 張翔宇 等 南高叢藍(lán)莓快繁技術(shù)體系 研究 J 植物研究 2014 34 1 131 135 9 馬懷宇 李亞東 劉慶忠 高叢越橘離體葉片再生植株研 究初報 J 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報 2004 35 2 212 215 10 韓婷婷 孫周平 矮叢藍(lán)莓葉片的愈傷組織誘導(dǎo)及植株 再生 J 西北植物學(xué)報 2010 30 3 615 620 11 李亞東 劉海廣 唐雪東 藍(lán)莓栽培圖解手冊 M 北 京 中國農(nóng)業(yè)出版社 2014 76 責(zé)任編輯 曾小軍