116 2021 年 第 62 卷第 1 期 收 稿日期 2020 11 07 基金項(xiàng)目 寧波市科技富民項(xiàng)目 2017C10007 作者簡(jiǎn)介 王麗麗 1987 女 浙 江紹興人 農(nóng)藝師 碩士 從事土壤肥料與微生物研究 E mail wanglili531 163 com 文獻(xiàn)著錄格式 王麗麗 朱詩(shī)君 金樹(shù)權(quán) 菌株 15 對(duì)甜瓜根腐病和西瓜枯萎病的防效 J 浙江農(nóng)業(yè)科學(xué) 2021 62 1 116 118 DOI 10 16178 j issn 0528 9017 20210139 菌 株 15 對(duì)甜瓜根腐病和西瓜枯萎病的防效 王 麗麗 朱詩(shī)君 金樹(shù)權(quán) 寧波市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院 浙 江 寧波 315040 摘 要 為 了研究菌株 15 對(duì)土傳病害的拮抗效果 以甜瓜根腐病和西瓜枯萎病為靶標(biāo)病害 研究菌株 15 對(duì)其防治作用 結(jié)果表明 菌株 15 在室內(nèi)能抑制甜瓜根腐病和西瓜枯萎病病原菌 室外對(duì)這 2 種病害也有一定 的防控效果 灌菌次數(shù)越多 防效越好 最高防效分別達(dá) 41 2 和 42 3 關(guān)鍵詞 菌株 15 芽孢桿菌 拮抗菌 甜瓜根腐病 西瓜枯萎病 防效 中圖分類號(hào) S144 9 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 B 文章編號(hào) 0528 9017 2021 01 0116 03 甜瓜根腐病是由真菌半知菌亞門(mén)瓜類腐皮鐮孢 菌 1 侵 染植株而引起的土傳病害 是甜瓜生產(chǎn)上 的常見(jiàn)病害 西瓜枯萎病是由真菌鐮孢屬引起的土 傳病害 在各地發(fā)生均較為嚴(yán)重 在重茬地發(fā)病率 為 30 以上 嚴(yán)重地塊可達(dá)到 80 以上 甚至造 成絕產(chǎn) 2 是 西瓜生產(chǎn)中危害最為嚴(yán)重的病害之 一 甜瓜根腐病和西瓜枯萎病病原菌均可長(zhǎng)期在土 壤中存活 因此 防治十分困難 利用 1 種或多種微生物來(lái)抑制病原菌生命活力 和繁殖能力的方法稱之為生物防治 其中利用拮抗 菌株防治土傳病害是生物防治的重要研究方向 也 是農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的主要防治措施之一 路曉萌 等 3 從甜瓜根際土壤中篩選得到 2 株根腐病拮抗菌 F22 和 T5b 這 兩株菌株對(duì)瓜類腐皮鐮孢菌均有較 好的拮抗效果 岳菊等 4 篩選得到的枯草芽孢桿 菌對(duì)真菌鐮孢屬菌絲生長(zhǎng)的抑制作用較為明顯 且 對(duì) 西瓜枯萎病的田間防控效果較好 葛慈斌等 5 篩選出的枯草芽孢桿菌對(duì)真菌鐮孢屬的抑制作用很 明 顯 室內(nèi)抑制效果能達(dá)到 80 6 孫立軍等 6 從 中藥植物金銀花的組織中分離到 1 株具有廣譜抗 菌活性的多粘芽孢桿菌 對(duì)真菌鐮孢屬具有很強(qiáng)的 抑制作用 對(duì)田間防治西瓜枯萎病有一定的效果 本研究對(duì)實(shí)驗(yàn)室之前篩選分離到的 1 株具有拮 抗作用的芽孢桿菌菌株 15 進(jìn)行深入研究 研究其 對(duì)其他土傳病害 甜瓜根腐病 西瓜枯萎病 的 室內(nèi)和田間防控效果 為菌株 15 的更廣泛應(yīng)用提 供技術(shù)支持 1 材料與方法 1 1 供試菌株和培養(yǎng)基 菌株 15 為實(shí)驗(yàn)室前期從黃瓜枯萎病發(fā)病嚴(yán)重 地區(qū)的健康土壤中分離到的 1 株芽胞桿菌 甜瓜根 腐病病原菌和西瓜枯萎病病原菌來(lái)自寧波市農(nóng)科院 蔬菜研究所 PDA 培養(yǎng)基 20 馬鈴薯浸出液 1 000 mL 200 g 馬鈴薯煮沸騰 15 min 定容至 1 000 mL 蔗糖 20 g 瓊脂 20 g 121 下滅菌 20 min 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 牛肉膏 5 g 蛋白胨 10 g 氯化鈉 5 g 自來(lái)水 1 000 mL pH 值為 7 2 7 4 121 滅菌 20 min 1 2 菌株 15 對(duì)甜瓜根腐病病原菌和西瓜枯萎病病 原菌的室內(nèi)拮抗效果 將甜瓜根腐病和西瓜枯萎病病原菌活化 然后 用打孔器打取直徑 6 mm 的菌苔置于平板中央 于 28 下培養(yǎng) 2 d 將菌株 15 菌落點(diǎn)接于病原菌菌 片周?chē)?以單獨(dú)接種病原菌菌苔的平板作為對(duì)照 于 28 恒溫培養(yǎng) 3 d 觀察病原菌生長(zhǎng)情況及有無(wú) 抑菌圈出現(xiàn) 挑取拮抗效果好的菌株進(jìn)行純化 將 純化后的菌株連續(xù)多次進(jìn)行平板對(duì)峙試驗(yàn) 觀察其 抑菌效果 1 3 菌株 15 對(duì)甜瓜根腐病的田間防控效果 田間試驗(yàn)在寧波市鄞州區(qū)寧波市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究 院東錢(qián)湖基地內(nèi)進(jìn)行 試驗(yàn)材料為菌株 15 發(fā)酵液 王 麗麗 等 菌株 15 對(duì)甜瓜根腐病和西瓜枯萎病的防效 117 試 驗(yàn)設(shè)置 1 0 10 6 T1 1 0 10 7 T2 1 0 10 8 T3 1 0 10 9 T4 mL 1 4 個(gè) 濃度梯度 于甜瓜移栽后 50 d 開(kāi)始施用菌株 15 的發(fā)酵液 每 隔 7 d 施用 1 次 共計(jì) 3 次 每株甜瓜澆灌 10 mL 每處理 3 次重復(fù) 以施用等量清水為對(duì)照 病情調(diào)查 甜瓜根腐病病情指數(shù)考查甜瓜根腐 病 分為 5 個(gè)級(jí)別 0 級(jí) 全株無(wú)病 外部無(wú)癥 狀 1 級(jí) 全株葉片總數(shù)的 1 4 以下葉片發(fā)病 或 莖內(nèi)維管束 1 4 以下變褐色 2 級(jí) 全株葉片總數(shù) 的 1 4 1 2 葉片發(fā)病 或莖內(nèi)維管束 1 4 1 2 變 褐色 3 級(jí) 全株葉片總數(shù)的 1 2 以上葉片發(fā)病 或莖內(nèi)維管束 3 4 以上變褐色 4 級(jí) 整株因病枯 死 計(jì)算病情指數(shù)和防治效果 1 4 菌株 15 對(duì)西瓜枯萎病的田間防控效果 田間試驗(yàn)在寧波市鄞州區(qū)寧波市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究 院東錢(qián)湖基地內(nèi)進(jìn)行 試驗(yàn)材料為菌株 15 發(fā)酵液 試驗(yàn)設(shè)置 1 0 10 6 T1 1 0 10 7 T2 1 0 10 8 T3 1 0 10 9 T4 mL 1 4 個(gè) 濃度梯度 于西瓜出苗后 10 d 開(kāi)始施用拮抗菌株的發(fā)酵液 每隔 7 d 施用 1 次 共計(jì) 3 次 每株西瓜苗澆灌 10 mL 每處理重復(fù) 3 次 以施用等量清水為對(duì)照 病情調(diào)查 西瓜枯萎病發(fā)病程度分為 5 個(gè)級(jí) 別 0 級(jí) 植株正常生長(zhǎng) 1 級(jí) 葉片或莖蔓萎焉 萎焉面積由下而上占全株的 1 4 或不到 1 4 2 級(jí) 葉片或莖蔓萎焉 萎焉面積由下而上占全株的 1 2 莖蔓上有樹(shù)脂狀琥珀色黏液 3 級(jí) 葉片或莖 蔓萎焉 萎焉面積由下而上占全株的 3 4 莖蔓上 有樹(shù)脂狀琥珀色黏液 4 級(jí) 全株萎焉死亡 計(jì)算 病情指數(shù)和防治效果 1 5 數(shù)據(jù)分析 采用 DPS 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 2 結(jié)果與分析 2 1 菌株 15 對(duì)甜瓜根腐病和西瓜枯萎病的室內(nèi)拮 抗效果 由圖 1 可知 菌株 15 對(duì)甜瓜根腐病和西瓜枯 萎病病原菌均具有一定的拮抗性 在平板上有一定 的拮抗圈 2 2 菌株 15 對(duì)甜瓜根腐病的生物防效 由表 1 可知 隨著菌株 15 發(fā)酵液濃度的增加 對(duì)甜瓜根腐病的防效增高 隨著灌根次數(shù)的增多 其 防效也越好 灌根 3 次后 T4 的防效最好 但與 T2 T3 無(wú)顯著差異 顯著高于 T1 因此 推薦濃度為 T2 T4 其 3 次灌菌后的防效為 32 3 41 2 圖 1 菌 株 15 的室內(nèi)拮抗效果 表 1 菌株 15 發(fā)酵液對(duì)甜瓜根腐病的田間防效 濃 度 處 理 1 次 灌菌后 2 次 灌菌后 3 次灌菌后 病指 防效 病指 防效 病指 防效 T1 0 32 15 5 b 0 37 24 9 b 0 41 28 2 b T2 0 31 17 8 ab 0 34 30 1 b 0 38 32 3 ab T3 0 29 22 3 ab 0 33 33 6 ab 0 36 36 7 ab T4 0 28 24 4 a 0 31 36 8 a 0 33 41 2 a CK 0 38 0 0 49 0 0 58 0 注 同列數(shù)據(jù)后無(wú)相同小寫(xiě)字母 表示組間差異顯著 P 0 05 表 2 同 2 3 菌 株 15 對(duì)西瓜枯萎病的生物防效 由表 2 可知 隨著菌株 15 發(fā)酵液濃度的增加 菌株 15 對(duì)西瓜枯萎病的防效增高 隨著灌根次數(shù) 的增多 其防效也越高 灌根 3 次后 T4 處理的 防效最好 與 T3 無(wú)顯著差異 與 T1 T2 差異顯 著 因此 推薦菌株 15 發(fā)酵液濃度為 T3 T4 其 3 次灌菌后的防治效果為 35 8 42 3 表 2 菌株 15 發(fā)酵液對(duì)西瓜枯萎病的田間防效 濃 度 處 理 1 次 灌菌后 2 次 灌菌后 3 次灌菌后 病指 防效 病指 防效 病指 防效 T1 0 31 13 8 a 0 37 21 2 c 0 38 28 5 b T2 0 28 21 0 a 0 34 26 7 bc 0 35 33 3 b T3 0 28 23 2 a 0 33 30 1 ab 0 33 35 8 ab T4 0 27 25 6 a 0 30 35 7 a 0 30 42 3 a CK 0 36 0 0 50 0 0 50 0 3 小 結(jié)與討論 土傳病害是發(fā)生在植株根部或莖部且以土壤為 媒介進(jìn)行傳播病害的統(tǒng)稱 7 一 般包括根腐病 枯萎病 猝倒病 立枯病 疫病 黃萎病等病害種 類 土傳病害的病原菌的生活史一部分或者大部分 在土壤中完成 在條件適宜時(shí)病原菌萌發(fā) 并且侵 染植株根部或莖部導(dǎo)致植株發(fā)生病害 8 近 年來(lái) 由于化肥的大量施用 不但造成土壤肥力嚴(yán)重下降 和化肥的超量 還導(dǎo)致土壤微生物區(qū)系紊亂 使得 118 2021 年 第 62 卷第 1 期 農(nóng)作物土傳病害逐年加重 這給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)帶來(lái)巨大 經(jīng) 濟(jì)損失 嚴(yán)重制約著農(nóng)業(yè)生產(chǎn)發(fā)展 9 化學(xué)藥劑在防治植株土傳病害上發(fā)揮著重要作 用 但化學(xué)藥劑存在很多弊端 首 先 化學(xué)藥劑大 量應(yīng)用引起藥物殘留 導(dǎo)致環(huán)境污染 其次 化學(xué) 藥劑大量使用還會(huì)導(dǎo)致病原微生物產(chǎn)生抗藥性 使 得防治工作更加困難 10 12 利用拮抗細(xì)菌防治植 株土傳病害具有成本低 環(huán)境友好和無(wú)藥物殘留等 特 點(diǎn) 具有廣闊的應(yīng)用前景 13 15 本 試驗(yàn)通過(guò)菌株 15 對(duì)甜瓜根腐病 西瓜枯萎 病的室內(nèi)和田間防控效果研究表明 菌株 15 室內(nèi) 能拮抗甜瓜根腐病和西瓜枯萎病病原菌 田間對(duì)這 兩種病害也有一定的防控效果 且灌菌次數(shù)越多 防治效果也越好 最高防效分別可達(dá) 41 2 和 42 3 菌株 15 對(duì)根腐病和枯萎病的生防機(jī)理有 待進(jìn)一步研究 參 考文獻(xiàn) 1 李 金玉 甜瓜抗病基因同源序列的克隆與序列分析 D 烏魯木齊 新疆大學(xué) 2006 2 徐偉慧 周巖 吳鳳芝 西瓜枯萎病的研究進(jìn)展 J 中國(guó) 蔬菜 2013 8 4 11 3 路 曉萌 姚良同 趙麗明 等 三株甜瓜拮抗細(xì)菌的篩選 與鑒定 J 生物技術(shù)通報(bào) 2010 5 111 115 4 岳 菊 劉郵洲 張榮勝 等 西瓜枯萎菌拮抗細(xì)菌的篩選 鑒定及防效測(cè)定 J 中國(guó)生物防治學(xué)報(bào) 2011 27 3 428 432 5 葛 慈斌 劉波 朱育菁 等 生防菌 NH BS 2000 對(duì)西瓜枯 萎病原菌抑制作用的研究 J 廈門(mén)大學(xué)學(xué)報(bào) 自然科學(xué) 版 2004 43 S1 87 90 6 孫 力軍 陸兆新 別小妹 等 1 株抗菌植物內(nèi)生菌 EJH 2 菌株的分離和鑒定 J 中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志 2006 18 1 23 26 7 徐 美娜 王光華 靳學(xué)慧 土傳病害生物防治研究進(jìn)展 J 吉林農(nóng)業(yè)科學(xué) 2005 30 2 39 42 8 李 世東 繆作清 高衛(wèi)東 我國(guó)農(nóng)林園藝作物土傳病害發(fā) 生和防治現(xiàn)狀及對(duì)策分析 J 中國(guó)生物防治學(xué)報(bào) 2011 27 4 433 440 9 李 洪連 黃俊麗 袁紅霞 有機(jī)改良劑在防治植物土傳病 害中的應(yīng)用 J 植物病理學(xué)報(bào) 2002 32 4 289 295 10 ZAKI K MISAGHI I J HEYDA I A et al Control of cotton seedling damping off in the field by Burkholderia Pseudomonas cepacia J Plant Disease 1998 82 3 291 293 11 HEYDA I A MISAGHI I J Biocontrol activity of Burkholderiacepacia against hizoctoniasolani in herbicide treated soils J Plant and Soil 1998 202 1 109 116 12 HEYDA I A MISAGHI I J The role of rhizosphere bacteria in herbicide mediated increase in hizoctoniasolani induced cotton seedling damping off J Plant and Soil 2003 257 2 391 396 13 CHA UDATTAN Biological control of weeds by means of plant pathogens Significance for integrated weed management in modern agro ecology J Biocontrol 2001 46 2 229 260 14 BOTELHO G MENDON A HAGLE L C Fluorescent Pseudomonads associated with the rhizosphere of crops an overview J Brazilian Journal of Microbiology 2006 37 4 401 416 15 Abo Elyousr K A M Hashem M AliE H Integrated control of cotton root 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