園藝學(xué)報(bào) 2016 43 2 365 372 Acta Horticulturae Sinica doi 10 16420 j issn 0513 353x 2015 0590 http www ahs ac cn 365 收稿日期 2015 10 31 修回日期 2016 02 18 基金項(xiàng)目 山東省自然科學(xué)基金項(xiàng)目 ZR2014CM028 通信作者 Author for correspondence E mail guoxf 致謝 本論文研究在山東省農(nóng)業(yè)生態(tài)與環(huán)境重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)微生物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室完成 謹(jǐn)致謝意 山東省芍藥紅斑病病原菌鑒定 李 麗 1 宋淑香 1 劉會(huì)香 2 郭先鋒 1 1 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)院 山東泰安 271018 2 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院 山東泰安 271018 摘 要 從山東菏澤和泰安兩地感病芍藥 Paeonia lactiflora Pall 植株的葉片上進(jìn)行了紅斑病病原 分離純化和致病力檢測(cè) 并對(duì)致病菌進(jìn)行了形態(tài)學(xué)鑒定及 rDNA ITS 序列分析 研究結(jié)果表明 病樣組 織中可分離到兩種疑似病原菌 分離比例為 4 8 1 初步鑒定為鏈格孢 Alternaria alternata 和細(xì)極鏈格 孢 A tenuissima 進(jìn)一步 rDNA ITS 分析結(jié)果表明 兩種病原菌 5 8S rDNA 及其兩側(cè) ITS 區(qū)序列分別與 GenBank 中序列號(hào)為 KF380822 1 HM467832 1 的同源性最高 均為 99 由此確定兩種病原菌分別為 鏈格孢 Alternaria alternata和細(xì)極鏈格孢 A tenuissima 其序列已在 GenBank登錄 登錄號(hào)分別為 KR912224 和 KR912225 因此 確定山東省芍藥紅斑病是由鏈格孢 A alternata 和細(xì)極鏈格孢 A tenuissima 兩種病原 菌引起的復(fù)合侵染 關(guān)鍵詞 芍藥 紅斑病 病原鑒定 鏈格孢屬 rDNA ITS 中圖分類號(hào) S 682 1 2 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 0513 353X 2016 02 0365 08 Identification of Red Spot Pathogens on Peony in Shandong Province LI Li 1 SONG Shu xiang 1 LIU Hui xiang 2 and GUO Xian feng 1 1 College of Forestry Shandong Agricultural University Tai an Shandong 271018 China 2 College of Plant Protection Shandong Agricultural University Tai an Shandong 271018 China Abstract Red spot has been one of the most serious diseases in herbaceous peony production Identification of the pathogen causing the disease is necessary for the determination of effective treatment options In the present study firstly the fungi were isolated and purified from the infected leaves and the pathogenicity was detected by artificial inoculation Then the morphological characteristics and rDNA ITS sequence of the pathogens causing red spot disease was studied The results demonstrated that two kinds of suspected fungi A and B were isolated from the disease infected samples with the isolation ratio of 4 8 1 Both fungi were further confirmed pathogenic and therefore determined as the pathogens The morphological characteristics revealed that these two pathogens were Alternaria alternate and A tenuissima which was validated by further rDNA ITS analysis ITS1 5 8S rDNA ITS2 sequences of pathogen A and pathogen B were respectively highly homogenic with those of KF380822 1 and HM467832 1 in GenBank database hence they were respectively identified as A alternate and A tenuissima The sequences of these two pathogens have been submitted to GenBank and the accession numbers are KR912224 and KR912225 Based on the above results it was concluded that red spot disease Li Li Song Shu xiang Liu Hui xiang Guo Xian feng Identification of red spot pathogens on peony in Shandong Province 366 Acta Horticulturae Sinica 2016 43 2 365 372 on herbaceous peony in Shandong province was caused by both A alternate and A tenuissima Key words Paeonia lactiflora red spot pathogen identification Alternaria rDNA ITS 芍藥 Paeonia lactiflora Pall 紅斑病又稱褐斑病 是芍藥生產(chǎn)中最常見的病害 在中國大部分 芍藥種植產(chǎn)區(qū)常大面積發(fā)生 該病危害芍藥莖 葉 花和蓇葖果 尤以葉片危害最為嚴(yán)重 一般植 株在開花前后即感染 在夏季高溫多雨時(shí)發(fā)病嚴(yán)重 李嘉玨 1999 秦魁杰 2004 該病害嚴(yán)重降 低植株的觀賞價(jià)值 而且還極大影響葉片正常的光合作用 阻礙芍藥地下芽的發(fā)生及花芽分化 導(dǎo) 致植株第 2 年的開花數(shù)量及花朵品質(zhì)明顯下降 因此 準(zhǔn)確鑒定芍藥紅斑病致病病原菌 對(duì)生產(chǎn)實(shí) 踐中的科學(xué)防控具有重要研究和實(shí)用意義 前人關(guān)于芍藥病害的報(bào)道多集中在病害綜述 俞思佳 等 1993 李桂凡 等 2001 和不同地 區(qū)病害種類調(diào)查及品種抗病性研究方面 姜瑤 等 2013 石顏通 等 2014 但對(duì)病原菌的鑒定研 究較少 僅藍(lán)瑩等 1984 1987 對(duì)南京地區(qū)芍藥灰霉病及紅斑病開展過病原的形態(tài)學(xué)鑒定及生物 學(xué)特性研究 在其關(guān)于芍藥紅斑病病原方面的研究中 報(bào)道了南京地區(qū)芍藥紅斑病的病原菌為鏈格 孢 但在不同地域不同生態(tài)條件下某種病害的致病病原可能存在差異 范子耀 等 2013 山東省 是中國觀賞芍藥品種最為集中 種植規(guī)模最大的產(chǎn)區(qū) 其紅斑病發(fā)生的病原是否與前人研究報(bào)道一 致 目前尚無相關(guān)研究證實(shí) 本研究中以栽種于山東菏澤和泰安的芍藥為研究對(duì)象 擬通過植物病原真菌的形態(tài)學(xué)特征 致 病性檢測(cè)以及 rDNA ITS internal transcribed spacer region of the ribosomal DNA 序列分析 明確其 芍藥紅斑病致病病原的種類 1 材料與方法 1 1 材料 病原分離的寄主植物材料采自山東省泰安市山東農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)實(shí)驗(yàn)站芍藥種植資源圃和山東 省菏澤市曹州牡丹園 從前者產(chǎn)地采集的寄主芍藥品種有 春曉 大富貴 粉玉奴 紅星滿 天 蝴蝶戲金花 菱花晨浴 奇花露霜 巧玲 楊妃出浴 紅樓藏金 等 10 個(gè)品種 從后者產(chǎn)地采集的有 晨曦 丹鳳 粉玉奴 魯紅 奇花露霜 等 5 個(gè)品種 1 2 病原菌的分離與純化 2013 年 5 6 月 通過形態(tài)調(diào)查結(jié)合病害研究專家協(xié)同診斷 從其感病植株的病葉 莖 花上 共分離了 561 塊組織病塊 采用常規(guī)組織分離法進(jìn)行病原菌的分離 方中達(dá) 1998 清洗芍藥病樣 取其病健交界處的組織小塊 約 2 mm 2 mm 先后用 75 的酒精和 0 1 的升汞各消毒 30 s和 2 min 無菌去離子水沖洗 之后接種于 PDA 培養(yǎng)基平板上 每皿 5 塊 置于光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 5 6 d 培養(yǎng)條件為 28 12 h 12 h 光暗交替 3 次重復(fù) 病原菌的純化采用單孢分離法 龔國淑 等 2010 純化菌株于 4 保存?zhèn)溆?1 3 致病性測(cè)定 采用離體刺傷接種法 清水作對(duì)照 同時(shí)采用無傷接種作為陽性對(duì)照 檀根甲 等 2008 吳 良慶 等 2010 將純化后培養(yǎng) 5 7 d 的新鮮病原菌的菌落 菌絲或孢子配成懸浮液 濃度為 1 10 6 李 麗 宋淑香 劉會(huì)香 郭先鋒 山東省芍藥紅斑病病原菌鑒定 園藝學(xué)報(bào) 2016 43 2 365 372 367 個(gè) mL 1 每個(gè)病原物接種時(shí) 均選健康葉片 30 40 片 接種前將組織用滅菌水清洗干凈 經(jīng) 75 酒精表面消毒后 用滅菌的昆蟲針刺成微傷口 接種病原菌孢子懸浮液 100 L 于傷口處 28 12 h 12 h 光暗交替 保濕培養(yǎng) 3 d 后觀察記錄發(fā)病情況 病原物接種致病后 將發(fā)病的組織進(jìn)行 病原的重新分離 檢驗(yàn)分離病原是否與接種病原一致 1 4 病原菌的形態(tài)鑒定與分子鑒定 將分離純化后的菌株接種于 PDA 培養(yǎng)基上培養(yǎng) 觀察記錄菌落的顏色 形狀 表面特征 生 長速度等 在顯微鏡下觀察孢子的類型 大小 顏色 分生孢子梗特征等 采用液體培養(yǎng)法 將菌絲置于 PSA 培養(yǎng)基中 于 28 200 r min 1 振蕩培養(yǎng) 3 d 獲得大量 菌絲 再采用兩層無菌濾紙進(jìn)行抽濾 65 烘干備用 采用 2 CTAB 法提取總 DNA 易潤華 等 2003 PCR 擴(kuò)增采用真菌 rDNA 通用引物 ITS1 和 ITS4 均由北京華大基因合成 用于 ITS 序列的 PCR 擴(kuò)增反應(yīng)體系為 25 mL 10 緩沖液 2 5 mL MgCl 2 1 0 mL ITS1 和 ITS4 各 2 0 mL 2 5 U L 1 的 Taq 酶 0 5 mL DNA 模板 1 0 mL ddH 2 O 15 0 mL 反應(yīng)程序?yàn)?94 預(yù)變性 3 min 94 變性 1 min 55 退火 1 min 72 延伸 2 min 30 個(gè)循環(huán) 72 保溫 10 min 4 保溫 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物采用 1 的瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測(cè) 采用純化回收試劑盒 BIOMIGA 生物公司 進(jìn)行回收 PCR 回收產(chǎn)物送交北京華大基因研究中心有限公司進(jìn)行測(cè)序 將測(cè)序完成的菌株序列提交到 NCBI 上 并用 BlastTn 進(jìn)行同源性比對(duì) 確定菌株的分類地位 為構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹 將已知種屬的序列 表 1 與目標(biāo)序列以 FASTA 格式編輯成為一個(gè)文本文 件 并加入其它外屬序列進(jìn)行對(duì)比 用 MEGA5 05 的 Neighbor Joining 法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹 采用自 舉法 bootstrap 對(duì)系統(tǒng)發(fā)育樹進(jìn)行檢驗(yàn) 共 1 000 次循環(huán) 以保證系統(tǒng)樹的可靠性 最后將所得系 統(tǒng)樹以 EMF 的形式輸出保存 表 1 用于系統(tǒng)發(fā)育分析的引用序列 Table 1 The reference sequences used in phylogenetic analysis 種類 菌株 ITS 登錄號(hào) 種類 菌株 ITS 登錄號(hào) Species Strains GenBank accession Species Strains GenBank accession A alternata HETAO 10 KJ002064 MG3 HM467832 FS7 KP689210 A allii CBS121345 KJ718624 C 10 KJ526174 A sesami CBS240 73 JQ646427 KS44T14L KF380822 A zinniae CBS118 44 KJ718771 A tenuissima JL 7W JX867218 Cladosporium phaenocomae CPC18221 JF499882 FL8 KP689164 C multigeniculatum ATCC38012 AY352589 dzlw5 FJ949086 Venturia nashicola CYP51 AJ314649 2 結(jié)果與分析 2 1 病害田間癥狀 芍藥紅斑病為害芍藥葉片 莖 花 且在葉片上發(fā)病尤為嚴(yán)重 圖 1 A 常在開花前后發(fā)病 發(fā)病初期 葉片的正反面出現(xiàn)黃褐色針頭狀小點(diǎn) 隨后病斑擴(kuò)大增多 顏色加深 20 d 后病斑可擴(kuò) 大成 1 3 cm 大小的病斑 圓形或不規(guī)則形 呈現(xiàn)紅色 紅褐色 栗褐色至黑色 病斑發(fā)展不受葉 脈限制 可橫跨葉脈 擴(kuò)大成片 若病斑發(fā)生在葉片邊緣 可使葉片卷曲 后期病斑焦枯 在山東 Li Li Song Shu xiang Liu Hui xiang Guo Xian feng Identification of red spot pathogens on peony in Shandong Province 368 Acta Horticulturae Sinica 2016 43 2 365 372 泰安 菏澤地區(qū)的 8 9 月 當(dāng)溫度升高濕度增大時(shí) 可在葉片的正反面產(chǎn)生褐綠色的霉層 為病原 菌的分生孢子梗及分生孢子 可直接切片鏡檢 莖受害后 初期出現(xiàn)紫紅色的 長 圓形小點(diǎn) 部分凸起 之后病斑緩慢擴(kuò)展 直至相連成片 色深紅褐色如燒焦?fàn)?圖 1 B 花朵花期較短 因此受害后的表現(xiàn)不如葉片和莖嚴(yán)重 僅在花瓣 或花萼上出現(xiàn)紅褐色斑點(diǎn) 2 2 病原菌的分離及致病性檢測(cè) 經(jīng)組織分離 從 561 塊病樣組織塊中主要分離到兩種疑似病原菌 其中分離到 409 個(gè)疑似病原 菌 A 分離率 72 9 疑似病原菌 B 分離到 85 個(gè) 分離率 15 2 兩種疑似病原菌的分離比例為 4 8 1 此外 未長菌落和雜菌的 67 個(gè) 雜菌主要指細(xì)菌 兩種疑似病原分離物的致病性檢測(cè)分老葉接種 2013 年 8 月 和新葉接種 2014 年 4 月 結(jié) 果 表 2 發(fā)現(xiàn) 疑似病原物 A 圖 1 C 接種在老葉時(shí) 有傷接種葉片的發(fā)病率為 87 100 無傷接種葉片的發(fā)病率為 83 100 接種在新葉時(shí) 無論有傷接種還是無傷接種 葉片全部發(fā)病 而且品種間沒有差異 葉片接種疑似病原物 B 圖 1 D 后也可發(fā)病 發(fā)病率為 57 90 兩病 原物接種后的葉片發(fā)病癥狀與田間發(fā)病癥狀相同 將疑似病原菌 A 和 B 有傷接種到健康新葉 2 d 后 的發(fā)病癥狀如圖 1 E 和圖 1 F 將發(fā)病葉片進(jìn)行病原物再分離培養(yǎng) 得到的菌落與接種菌落表型 一致 因此 根據(jù)柯赫氏法則 確定病原物 A 和 B 均為芍藥紅斑病的致病菌 圖 1 芍藥紅斑病的發(fā)病癥狀及病原菌的形態(tài)特征 A 感病葉片 B 感病的莖 C 病原物 A 組菌落 菌株 F1 D 病原物 B 組菌落 菌株 P L3 1 E 病原物 A 接種 2 d 后的發(fā)病狀況 F 病原物 B 接種 2 d 后的發(fā)病狀況 G 病原物 A 鏈格孢菌 的分生孢子 H 病原物 B 細(xì)極鏈格孢菌 的分生孢子梗及分生孢子 Fig 1 Field symptoms of infected plants and morphological characteristics of the pathogens causing peony red spot disease A Infected leaves B Infected stem C Colony of pathogen A strain F1 D Colony of pathogen B strain P L3 1 E Symptom 2 days after inoculation with pathogen A F Symptom 2 days after inoculation with pathogen B G Conidia of the pathogen A A alternate H Conidiophores and conidia of the pathogen B A tenuissima 2 3 菌落及病原菌形態(tài)特征 純化后的菌落按其特征分為兩組 病原物 A 組的菌落培養(yǎng)特征表現(xiàn)為菌落圓形生長 初期灰白 李 麗 宋淑香 劉會(huì)香 郭先鋒 山東省芍藥紅斑病病原菌鑒定 園藝學(xué)報(bào) 2016 43 2 365 372 369 色 后轉(zhuǎn)為灰色至灰黑色 菌絲疏松 氣生菌絲茂盛 菌落隆起 菌落背面灰褐色 圖 1 C 病 原物 B 組的菌落培養(yǎng)特征表現(xiàn)為不規(guī)則圓形 菌落初期白色 后轉(zhuǎn)為灰色 菌絲致密 菌落隆起 菌落背面黃色至黃褐色 呈現(xiàn)規(guī)則的輪紋 邊緣顏色較淺 圖 1 D 供試菌株共產(chǎn)生兩種分生孢 子 一為倒梨形 卵形或圓柱形 大小為 20 0 39 0 m 8 0 14 5 m 具縱橫隔膜 有短 喙 圖 1 G 二為尖細(xì)長狹卵形 37 0 73 0 m 4 0 6 3 m 具縱橫隔膜 有細(xì)長柱狀 喙 圖 1 H 綜合菌落特征和分生孢子形態(tài) 初步鑒定兩種病原菌分別為鏈格孢 Alternaria alternata 和細(xì)極鏈格孢 A tenuissima 表 2 芍藥紅斑病接種致病性測(cè)定 Table 2 Pathogenicity test of red spot disease on peony 有傷接種 Innoculation with injury 無傷接種 Innoculation without injury 病原菌 Fungi 接種時(shí)間 Innoculation time 芍藥品種 Peony cultivar 接種葉片數(shù) Innoculated leaf number 感病 Infected 致病率 Infection percentage 感病 Infected 致病率 Infection percentage 致病性 Pathogenicity A 2013 08 春曉 Chunxiao 30 30 100 25 83 3 粉玉奴 Fenyunu 30 29 96 7 30 100 紅艷爭(zhēng)輝 Hongyan Zhenghui 30 27 90 0 26 86 7 朱砂判 Zhushapan 30 26 86 7 30 100 2014 04 晨曦 Chenxi 30 30 100 30 100 春曉 Chunxiao 40 40 100 40 100 大富貴 Dafugui 40 40 100 40 100 粉玉奴 Fenyunu 40 40 100 40 100 菱花晨浴 Linghua Chenyu 40 40 100 40 100 紅樓藏金 Honglou Cangjin 30 30 100 30 100 紅星滿天 Hongxing Mantian 30 30 100 30 100 奇花露霜 Qihua Lushuang 40 40 100 40 100 巧玲 Qiaoling 40 40 100 40 100 楊妃出浴 Yangfei Chuyu 40 40 100 40 100 B 2013 08 春曉 Chunxiao 30 21 70 0 20 66 7 粉玉奴 Fenyunu 30 19 63 3 17 56 7 紅艷爭(zhēng)輝 Hongyan Zhenghui 30 23 76 7 20 66 7 朱砂判 Zhushapan 30 23 76 7 22 73 3 2014 04 晨曦 Chenxi 30 25 83 3 25 83 3 春曉 Chunxiao 30 23 76 7 21 70 0 大富貴 Dafugui 30 21 70 0 21 70 0 粉玉奴 Fenyunu 30 27 90 0 21 70 0 菱花晨浴 Linghua Chenyu 30 25 83 3 23 76 7 紅樓藏金 Honglou Cangjin 30 23 76 7 23 76 7 紅星滿天 Hongxing Mantian 30 23 76 7 23 76 7 奇花露霜 Qihua Lushuang 30 27 90 0 26 86 7 巧玲 Qiaoling 30 21 70 0 19 63 3 楊妃出浴 Yangfei Chuyu 30 26 86 7 24 80 0 注 平均致病率 90 以上 平均致病率 60 90 平均致病率 30 60 Note and respectively mean that the average pathogenicity percentage was more than 90 60 90 and 30 60 2 4 病原菌的 rDNA ITS 序列分析 兩種病原菌分別以菌株 F1 和菌株 P L3 1 的 DNA 為模板 采用通用引物 ITS1 和 ITS4 進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增 分別獲得長度為 545 和 528 bp 的 ITS 序列 其序列在 GenBank 登錄號(hào)分別為 KR912224 和 KR912225 將所得序列在 NCBI 網(wǎng)站上與已知序列進(jìn)行 blast 比對(duì) 其 5 8S rDNA 及其兩側(cè)的 ITS 區(qū)分別與序列號(hào)為 KF380822 1 HM467832 1 的同源性最高 均為 99 KF380822 1 序列共 539 bp Li Li Song Shu xiang Liu Hui xiang Guo Xian feng Identification of red spot pathogens on peony in Shandong Province 370 Acta Horticulturae Sinica 2016 43 2 365 372 屬于鏈格孢菌 A alternata 而 HM467832 1 序列共 544 bp 屬于細(xì)極鏈格孢菌 A tenuissima 進(jìn)一步構(gòu)建的系統(tǒng)進(jìn)化樹 圖 2 可分為 4 大分支 其中鏈格孢屬 Alternaria 為第一大分支 兩 種供試菌株序列均緊密聚在其中 并且分別與登錄號(hào)為 KJ002064 1 KP689210 1 KJ526174 1 KF380822 1 及 JX867218 1 KP689164 1 FJ949086 1 HM467832 1 的序列聚合尤其緊密 遠(yuǎn)離該 屬其他種 如 A sesami 及另外兩個(gè)屬 枝孢屬 Cladosporium 和黑星菌屬 Venturia 充分說明 兩個(gè)供試菌株的 ITS 序列屬于鏈格孢屬 根據(jù)病原菌的形態(tài)鑒定 致病性測(cè)定和分子鑒定結(jié)果 山東省芍藥紅斑病的病原菌為鏈格孢菌 A alternata 和細(xì)極鏈格孢菌 A tenuissima 其中鏈格孢菌占優(yōu)勢(shì) 占分離物總數(shù)的 72 9 是細(xì)極鏈格孢分離率的 4 8 倍 圖 2 基于 rDNA ITS 序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹 Fig 2 Phylogenetic tree based on rDNA ITS sequences 3 討論 植物病原菌鑒定的傳統(tǒng)方法是采用顯微形態(tài)學(xué)鑒定為主 陸家云 2001 研究者認(rèn)為 在接 近自然的培養(yǎng)條件下 鏈格孢屬 Alternaria 真菌可根據(jù)菌落特征 產(chǎn)孢表型及分生孢子形態(tài)等開 展形態(tài)學(xué)鑒定 Simmons Roberts 1993 不過 眾多研究報(bào)道亦指出 該屬真菌的屬級(jí)特征明 顯 易于形態(tài)學(xué)鑒定 但種級(jí)特征變異較大 尤其是小孢子種形態(tài)特征易于受環(huán)境條件影響 因而 傳統(tǒng)方法極易受分類者的分類知識(shí)及經(jīng)驗(yàn)等人為影響 給種的形態(tài)鑒定造成很大困難 王洪凱 等 2001 張?zhí)煊?2003 Sajeewa et al 2011 曲文文 等 2012 近年來 以 PCR 為基礎(chǔ)的 rDNA ITS 序列分析由于特異性強(qiáng) 可靠性高 目前在許多植物鏈格孢屬真菌鑒定中得到成功應(yīng)用 如王洪凱 等 2011 用 5 8S rDNA 及 ITS 區(qū)序列分析了鏈格孢的種級(jí)分類 形態(tài)特征與 rDNA ITS 序列特征 相結(jié)合 已發(fā)展為當(dāng)前許多植物病原菌分類和鑒定的常用手段 本研究中從供試的 13 個(gè)芍藥品種的感病葉片 莖和花瓣上分離到兩種病原菌 經(jīng)形態(tài)鑒定 分子鑒定及致病性檢測(cè) 確定其為鏈格孢 A alternata 和細(xì)極鏈格孢 A tenuissima 與紅橘褐 斑病 陳昌勝 等 2011 山茱萸褐斑病 牛小瑞 等 2014 和核桃頂端壞死病及黑斑病 曲文文 李 麗 宋淑香 劉會(huì)香 郭先鋒 山東省芍藥紅斑病病原菌鑒定 園藝學(xué)報(bào) 2016 43 2 365 372 371 等 2012 等檢測(cè)到的相應(yīng)致病菌的形態(tài)一致 鏈格孢 A alternata 形態(tài)特征也與藍(lán)瑩等 1984 從芍藥紅斑病病葉上分離的鏈格孢菌形態(tài)一致 但其僅分離到 1 種病原菌 本研究中病樣采自山東 省菏澤地區(qū)和泰安地區(qū) 芍藥品種集中 種植規(guī)模大 其病害發(fā)生較之于南京市小量種植更具有代 表性 所以本研究結(jié)果表明 芍藥紅斑病可由鏈格孢 A alternata 和細(xì)極鏈格孢 A tenuissima 兩種病原菌引起 該鑒定結(jié)果為芍藥紅斑病的田間防治提供了重要參考 但是 兩種致病菌的流行 規(guī)律 對(duì)防治藥劑的敏感性乃至對(duì)野生芍藥的致病性等仍需進(jìn)行深入的研究 此外 需要補(bǔ)充說明的是 芍藥和牡丹是同屬種 二者常同園栽植 且牡丹紅斑病也是危害牡 丹植株的重要葉部病害 發(fā)病癥狀同芍藥紅斑病癥狀相似 不同于芍藥紅斑病病原菌 牡丹紅斑病 的主要致病菌為枝孢霉屬 Cladosporium spp 吳玉柱 等 2005 石良紅 等 2014 鏈格孢 A alternata 和枝孢霉屬 Cladosporium spp 病菌均屬于對(duì)寄主廣適性菌種 多生于植物的枯死部分 或衰弱組織上 張?zhí)煊?2003 那么鏈格孢 A alternata 細(xì)極鏈格孢 A tenuissima 與牡丹紅 斑病之間 枝孢霉屬 Cladosporium spp 與芍藥紅斑病之間的關(guān)系到底如何 顯然需要繼續(xù)交叉 病樣深入研究 References Chen Chang sheng Huang Feng Cheng Lan Feng Chun gang Huang Tao jiang Li Hong ye 2011 Identification of the pathogenic fungus causing brown spot on tangerine Citrus reticulata cv Hongjv Acta Phytopathologica Sinica 41 5 449 455 in Chinese 陳昌勝 黃 峰 程 蘭 馮春剛 黃濤江 李紅葉 2011 紅橘褐斑病病原鑒定 植物病理學(xué)報(bào) 41 5 449 455 Fan Zi yao Wang Wen qiao Meng Run jie Han Xiu ying Zhang Xiao feng Ma Zhi qiang 2013 Identification of the pathogens of potato early blight and their sensitivity to different fungicides Acta Phytopathologica Sinica 43 1 69 74 in Chinese 范子耀 王文橋 孟潤杰 韓秀英 張小風(fēng) 馬志強(qiáng) 2013 馬鈴薯早疫病病原菌鑒定及其對(duì)不同藥劑的敏感性 植物病理學(xué)報(bào) 43 1 69 74 Fang Zhong da 1998 Methodology for plant pathology 3rd ed Beijing China Agriculture Press in Chinese 方中達(dá) 1998 植病研究方法 第 3 版 北京 中國農(nóng)業(yè)出版社 Gong Guo shu Xu Qin Zhang Min Yang Ji zhi Chen Hua bao Shen Shi an Tang Tai fei 2010 A 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