收稿日期 修訂日期 基金項(xiàng)目 江西省教育廳項(xiàng)目 通信作者 爵床提取物對(duì)辣椒炭疽病菌的抑制 作用及其苗期防效 郭明程 李保同 湯麗梅 李曉花 梁同軍 江西農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院 南昌 江西廬山植物園 廬山 摘要 爵床 是一種傳統(tǒng)的中藥材 為探明爵床提取物對(duì)辣椒炭疽病菌的抑制作用 采用 生長速率法和孢子萌發(fā)法分別測定了爵床提取物對(duì)辣椒炭疽病菌菌絲生長 孢子產(chǎn)生和孢子萌發(fā)的抑制作用 采用苗 期盆栽試驗(yàn)觀察爵床提取物對(duì)辣椒炭疽病的防治效果 結(jié)果表明 爵床甲醇提取物可抑制辣椒炭疽病菌菌絲生長 孢 子產(chǎn)生和孢子萌發(fā) 其活性隨著濃度的提高而增強(qiáng) 抑制中濃度分別為 和 通過對(duì)爵床提取 物處理后病菌孢子萌發(fā)形態(tài)顯微觀察 發(fā)現(xiàn)病菌孢子芽管長度受到明顯抑制甚至不能萌發(fā) 當(dāng)提取物濃度為 時(shí)對(duì)苗期辣椒炭疽病的防效達(dá) 關(guān)鍵詞 爵床 植物提取物 辣椒炭疽病菌 抑制作用 防治效果 中圖分類號(hào) 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 辣椒炭疽病 是一種發(fā)生普遍且危害嚴(yán)重的世界性辣椒病害 早 期在葉片上有壞死斑 后期在成熟的果實(shí)上出現(xiàn)水 漬狀凹陷病斑 對(duì)辣椒的產(chǎn)量 品質(zhì)和貯藏產(chǎn)生很大 的影響 目前植物病害主要依賴化學(xué)農(nóng)藥進(jìn)行防 治 這不僅易造成環(huán)境和食品污染 還易誘發(fā)病原菌 的抗藥性 為尋求安全有效的防治措施 植物病害 的生物防治越來越引起人們的關(guān)注 植物是生物活 性化合物的天然寶庫 各類植物中含有數(shù)以萬計(jì)的 次生代謝產(chǎn)物 其中生物堿類 萜烯類 黃酮類 檸檬 素和番荔枝內(nèi)酯等化合物都具有較強(qiáng)的抑菌活 性 周琳等 研究了旋覆花花序不同溶劑萃取物 對(duì)麥冬炭疽病菌 棉花枯萎病菌 板栗炭疽病菌 玉 米青枯病菌等 種植物病原真菌的抑菌活性 吳新 安等 研究了蛇床子 虎杖提取物對(duì)蘋果炭疽病菌 番茄枯萎病菌的抑制作用 有關(guān)植物提取物對(duì)辣椒 炭疽病的防治效果也有一些報(bào)道 張新強(qiáng)等 研究 發(fā)現(xiàn)黃芩 苦參 金銀花 板藍(lán)根和補(bǔ)骨脂提取物對(duì) 辣椒炭疽病菌具有抑制作用 郝衛(wèi)寧等 報(bào)道茶皂 素和小檗堿水劑對(duì)大田辣椒炭疽病菌具有良好的防 治效果 爵床 是一種傳統(tǒng)的中藥 材 在我國南方各省及臺(tái)灣等地均有分布 資源十分 豐富 等 研究發(fā)現(xiàn)爵床可用于防治南 方根結(jié)線蟲和爪哇根結(jié)線蟲 曾志紅等 報(bào)道爵床 提取物對(duì)金黃色葡萄球菌 大腸埃希氏菌和沙門氏 菌有良好的抑制效果 因此 爵床提取物有可能作為 一種潛在的生物源殺菌劑 目前 有關(guān)爵床提取物 對(duì)辣椒炭疽病菌的活性未見報(bào)道 為明確爵床提取 物對(duì)辣椒炭疽病的抑制作用 作者在前期研究的基 礎(chǔ)上 測試了爵床甲醇提取物對(duì)辣椒炭疽病菌菌絲 生長 分生孢子產(chǎn)生與萌發(fā)的抑制作用及在辣椒苗 上對(duì)炭疽病的防治效果 以期為爵床的進(jìn)一步開發(fā) 利用提供依據(jù) 材料與方法 試驗(yàn)材料 供試植物材料的來源及提取方法 爵床 年 月采自江西廬山植物園 全株經(jīng) 清洗 晾干 干燥后 小型粉碎機(jī)粉碎 過 目 篩 稱取 爵床粉碎物 用 甲醇超聲 波提取 后 過濾 將濾渣再用 甲醇提 取 次 合并濾液 濃縮至干 得到 膏狀 提取物 加入少量甲醇將膏狀提取物溶解后 用 吐溫 水溶液配制成相應(yīng)濃度的藥液 辣椒炭疽病菌 由江西農(nóng) 業(yè)大學(xué)植物病理實(shí)驗(yàn)室提供 于 恒溫生化培 養(yǎng)箱中繼代培養(yǎng) 恒溫箱中保存 辣椒 選用感病品種 黃蜂 由南昌市蔬菜研究 所提供 化學(xué)藥劑 農(nóng)抗 可溶粉劑 武漢科諾生物農(nóng)藥有限公司生產(chǎn) 爵床提取物對(duì)辣椒炭疽病菌的室內(nèi)抑菌作用 對(duì)辣椒炭疽病菌菌絲生長的抑制作用 采用菌絲生長速率法 在無菌錐形瓶內(nèi)加 入預(yù)先融化的滅菌 培養(yǎng)基 吸取藥液 加入錐形瓶內(nèi) 充分搖勻 等量倒入 個(gè)培養(yǎng) 皿中制成含藥平板 試驗(yàn)設(shè)不含藥劑的溶劑處理作 對(duì)照 每 處 理 重 復(fù) 次 在 無 菌 條 件 下 用 直 徑 的滅菌打孔器將培養(yǎng)好的病原菌自菌落邊緣 切取菌餅 用接種器將菌餅接入含藥平板中央 菌絲 面朝下 蓋上皿蓋 置于 培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng) 用卡尺測量菌落直徑 每個(gè)菌落用十字 交叉法垂直測量直徑各 次 取其平均值 抑菌率 按下式計(jì)算 抑菌率 對(duì)照菌落直徑 菌餅直徑 處理菌落直徑 菌餅直徑 對(duì)照菌落直徑 菌餅直徑 用 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)藥劑濃度 的對(duì)數(shù)與抑菌率的幾率值進(jìn)行回歸分析 計(jì)算各處 理的 和 對(duì)辣椒炭疽病菌產(chǎn)孢的抑制作用 參照王樹桐 的方法 按 方法制備含毒 培養(yǎng)基和接種 置于 培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng) 取 無菌水加入到平皿中 輕輕將分生孢子洗下 搖勻 并 定容至 取孢子懸浮液 加入到 無 菌水中 配制成稀釋 倍的分生孢子懸浮液 取此懸 浮液 在顯微鏡下用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)孢子個(gè)數(shù) 最終換算成孢子數(shù) 每處理重復(fù) 次 爵床提取物對(duì)辣椒炭疽病菌孢子萌發(fā)的抑 制作用 參照郝衛(wèi)寧 的方法 辣椒炭疽病菌菌種接種 至 培養(yǎng)基 于 恒溫培養(yǎng)箱中黑暗培 養(yǎng) 待表面長出大量孢子后 用水將其配為 個(gè) 的孢子懸浮液 將供試藥劑加 吐溫 助溶并稀釋成相應(yīng)設(shè)計(jì)濃度 與辣椒炭疽病 菌孢子懸浮液以 比例混配 另設(shè)不加藥的 吐溫 水溶液為對(duì)照 置于 恒溫培養(yǎng)箱 中培養(yǎng) 后調(diào)查萌發(fā)率 每處理隨機(jī)抽查 個(gè) 視野 調(diào)查孢子總數(shù)不少于 個(gè) 重復(fù) 次 孢子 芽管超過孢子短半徑為萌發(fā)狀態(tài) 萌發(fā)率在 以 上為有效試驗(yàn) 計(jì)算校正抑制率 用 統(tǒng)計(jì)軟件 對(duì)藥劑濃度的對(duì)數(shù)與校正抑制率的幾率值進(jìn)行回歸 分析 計(jì)算各處理的 和 爵床提取物對(duì)辣椒炭疽病的盆栽防治效果 用 圓盆缽 每盆移栽 葉期辣 椒幼苗 株 分別噴施用 吐溫 水溶液稀釋的 爵床甲醇提取物 的藥液 以噴 吐溫 水溶液為空白對(duì)照 每處理 株 重復(fù) 次 共 株 后噴霧接種辣椒炭疽病病菌孢子懸 卷第 期 郭明程等 爵床提取物對(duì)辣椒炭疽病菌的抑制作用及其苗期防效 浮液 個(gè) 接種后移至 的保濕 箱 內(nèi)遮光誘發(fā)發(fā)病 后再移至 溫室內(nèi)培養(yǎng) 用藥后 調(diào)查各處理病情指數(shù) 與 空白對(duì)照比較 計(jì)算防治效果 辣椒炭疽病情調(diào)查分 級(jí)標(biāo)準(zhǔn) 級(jí) 無癥狀 級(jí) 病斑直徑 有 片葉發(fā)病 級(jí) 病斑直徑在 有 片真葉發(fā)病 或有少數(shù)大斑 級(jí) 病斑直徑在 并產(chǎn)生孢子 或有 片以上葉片發(fā)病 病株出 現(xiàn)落葉 株形不正常 級(jí) 有許多大斑 大量產(chǎn)生孢 子 病株大量落葉 近枯死或枯死 用 氏方法 對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析 比較各處理間的差異 結(jié)果與分析 爵床提取物對(duì)辣椒炭疽病菌菌絲生長的抑制作用 爵床提取物對(duì)辣椒炭疽病菌菌絲生長有顯著的抑 制作用 對(duì)菌絲生長的抑制中濃度 為 值為 表 表 對(duì)辣椒炭疽病菌產(chǎn)孢的抑制作用 爵床提取物對(duì)辣椒炭疽病菌分生孢子產(chǎn)生具有 顯著的抑制作用 其抑制率與提取物的濃度呈正相 關(guān) 處理的病菌菌絲塊中僅有少量的分生孢 子產(chǎn)生 對(duì)孢子產(chǎn)生的抑制中濃度 為 值為 處理抑制率 達(dá) 表 表 試驗(yàn)過程中還發(fā)現(xiàn) 提取物各 處理均表現(xiàn)不同程度產(chǎn)孢推遲的現(xiàn)象 對(duì)辣椒炭疽病菌孢子萌發(fā)的抑制作用 爵床提取物對(duì)辣椒炭疽病菌孢子萌發(fā)有顯著的 抑制作用 其抑制率與提取物的濃度呈正相關(guān) 對(duì)孢 子萌發(fā)的抑制中濃度 為 值為 表 表 表 爵床提取物對(duì)辣椒炭疽病菌菌絲生長 孢子產(chǎn)生和孢子萌發(fā)的抑制作用 濃度 對(duì)菌絲生長的抑制作用 菌落平均直徑 抑制率 對(duì)產(chǎn)孢的抑制作用 孢子數(shù) 個(gè) 抑制率 對(duì)孢子萌發(fā)的抑制作用 萌發(fā)率 抑制率 表中數(shù)據(jù)為 次重復(fù)的平均值 每組數(shù)據(jù)同列中不同英文字母表示差異達(dá)顯著水平 表 爵床提取物對(duì)辣椒炭疽病菌菌絲生長 孢子產(chǎn)生和孢子萌發(fā)的毒力 處理 回歸式 相關(guān)系數(shù) 對(duì)菌絲生長的抑制作用 對(duì)產(chǎn)孢的抑制作用 對(duì)孢子萌發(fā)的抑制作用 通過顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn) 未用爵床提取物處理的 菌株分生孢子多從頂端或側(cè)面萌 發(fā)長出 根芽管 提取物 處理對(duì)孢子萌發(fā) 抑制率較小 但明顯抑制芽管的伸長 圖 較高濃 度的提取物可明顯抑制孢子的萌發(fā) 其活性隨著濃 度的提高而增強(qiáng) 高濃度提取物 處理僅 有少數(shù)的孢子萌發(fā) 圖 爵床提取物對(duì)辣椒炭疽病菌孢子萌發(fā)的抑制效果 對(duì)辣椒炭疽病的盆栽防治效果 盆栽試驗(yàn)結(jié)果表明 爵床提取物對(duì)辣椒炭疽病 具有良好的防治效果 以上濃度均已表現(xiàn) 出顯著的防效 處理防效達(dá) 表 爵床提取物對(duì)辣椒炭疽病菌的盆栽防效 處理 濃度 病情指數(shù) 防治效果 農(nóng)抗 爵床提取物 結(jié)論與討論 本研究通過菌絲生長速率法證明了爵床提取物 對(duì)辣椒炭疽病菌菌絲生長有良好的抑制作用 并發(fā) 現(xiàn)爵床提取物能抑制孢子產(chǎn)生和萌發(fā) 盆栽試驗(yàn)結(jié) 果進(jìn)一步表明 提取物對(duì)辣椒炭疽病有良好的防治 效果 以上試驗(yàn)結(jié)果表明 爵床提取物中含有對(duì)辣 椒炭疽病菌抑菌或殺菌作用的活性物質(zhì) 植物中具 有抑菌活性的化合物有四大類 萜類化合物及其衍 生物 生物堿 酰胺及蛋白質(zhì)等含氮含硫化合物 脂 肪類化合物 主要是長鏈碳烷和脂肪酸 芳香族化合 物 包括酚類 黃酮類以及芪類等 爵床屬植物 的根莖主要含木脂素 三萜 黃酮 香豆素 生物堿和 脂肪酸等類型的化合物 已經(jīng)鑒定出的有 種 其 中木脂素類 種 三萜類 種 黃酮類 種 香豆素 類 種 生物堿類 種 脂肪酸類 種 此外還有甾 醇類 多肽類及微量元素 作者前期研究發(fā)現(xiàn) 爵床不同極性溶劑提取物對(duì)植物病原真菌均有不同 程度的抑制作用 其中以甲醇提取物活性最高 由此可以初步推斷爵床抑菌活性成分以中極性化合 物較多 親脂性化合物相對(duì)較少 其單體的抑菌活性 和作用機(jī)理有待進(jìn)一步研究 辣椒炭疽病菌侵入植物體內(nèi)的一般過程是分生 孢子通過風(fēng)雨 昆蟲傳播落在辣椒植株表面 在潮濕 條件下萌發(fā)形成芽管和附著胞直接侵入寄主組織 或通過 氣 孔 和 傷 口 侵 入 然后擴(kuò)展形成菌絲發(fā) 病 本研究中 爵床提取物對(duì)辣椒炭疽病菌的孢 子產(chǎn)生 孢子萌發(fā)和菌絲生長均表現(xiàn)出一定的抑制 作用 這表明爵床提取物對(duì)辣椒炭疽病菌的侵入和 擴(kuò)展均可能產(chǎn)生不同程度的影響 殺菌劑對(duì)病原菌 的作用機(jī)制有多種 如抑制真菌細(xì)胞壁形成和質(zhì)膜 生物合成 抑制呼吸作用 抑制甾醇生物合成 抑制甾醇生物合成過程中的脫甲基 增加線粒體膜和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上的脂質(zhì)過氧化反應(yīng) 等 爵床提取物的抑菌及防病機(jī)制還有待進(jìn)一 步研究 張新強(qiáng)等 報(bào)道黃芩 苦參 金銀花 板藍(lán) 卷第 期 郭明程等 爵床提取物對(duì)辣椒炭疽病菌的抑制作用及其苗期防效 根和補(bǔ)骨脂提取物對(duì)辣椒炭疽病菌菌絲生長抑制中 濃度 分 別 為 林琳等 報(bào)道小檗堿對(duì)辣椒炭疽病 菌菌絲生長抑制中濃度 為 小檗堿水劑 倍液第 次施藥 后對(duì)辣 椒炭疽病校正防效分別達(dá) 和 本研 究中 爵床提取物對(duì)辣椒炭疽病菌菌絲生長抑制中 濃度 為 爵床提取物 處理 施 藥 次 后對(duì)辣椒炭疽病防效達(dá) 其活性明顯高于黃芩 苦參 金銀花 板藍(lán) 根和補(bǔ)骨脂提取物 低于從植物中提取 分離后的純 活性堿小檗堿 由于本研究采用的是爵床粗提物 從植物源殺菌劑的開發(fā)應(yīng)用來看 爵床仍有較好的 利用價(jià)值 參考文獻(xiàn) 董 金 皋 植 物 病 理 學(xué) 北 方 本 北 京 中 國 農(nóng) 業(yè) 出 版 社 吳傳萬 杜小鳳 徐建明 等 植物源抑菌活性成分研究新進(jìn) 展 西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 周琳 焦斌 高飛 等 旋覆花花序不同溶劑萃取物對(duì)植物病 原真菌的抑菌活性 浙江大學(xué)學(xué)報(bào) 農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版 吳新安 花日茂 岳永德 等 幾種中草藥提取物對(duì)植物病原 菌的抗菌活性研究 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào) 張新強(qiáng) 桑維鈞 倪云躍 等 中草藥提取物對(duì)辣椒炭疽病菌和 番茄灰霉病原菌的抑制效果 貴州農(nóng)業(yè)科學(xué) 郝衛(wèi)寧 陳文團(tuán) 胡美英 等 茶皂素與代森錳鋅對(duì)辣椒炭疽 病菌的聯(lián)合毒力 中國蔬菜 林琳 高智謀 高同春 等 濃度 小檗堿對(duì) 種辣椒炭疽 病的 防 治 效 果 安 徽 農(nóng) 業(yè) 科 學(xué) 全國中草藥匯編編寫組 全國中草藥匯編 上冊(cè) 北京 人民衛(wèi)生出版社 曾志紅 何建仁 三種常見植物體外抑菌活性的初步研究 莆田學(xué)院學(xué)報(bào) 慕立義 植物化學(xué)保護(hù)研究方法 北京 中國農(nóng)業(yè)出版 社 王樹桐 曹克強(qiáng) 張鳳巧 等 中藥丁香提取物對(duì)番茄灰霉病 菌抑制作用及生防效果 植物病理學(xué)報(bào) 何紅 蔡學(xué)清 關(guān)雄 等 辣椒內(nèi)生枯草芽孢桿菌 和 防治辣椒炭疽病研究 植物病理學(xué) 報(bào) 周仕濤 我國植物源農(nóng)藥的研究及前景 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 劉文坤 陳思強(qiáng) 邵明國 等 爵床屬植物的化學(xué)成分和藥理活 性研 究 進(jìn) 展 天然產(chǎn)物研究與開發(fā) 郭明程 李保同 湯麗梅 等 爵床提取物的抑菌殺蟲活性研 究 中國生態(tài)農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 徐雍皋 徐敬友 農(nóng)業(yè)植物病理學(xué) 北京 江蘇科學(xué)技術(shù) 出版社 刁春玲 劉芳 宋寶安 等 農(nóng)用殺菌劑作用機(jī)理的研究進(jìn)展 農(nóng)藥 張鷺 侯玉霞 袁會(huì)珠 等 復(fù)合物 抑制劑型殺菌劑結(jié)構(gòu)類型 和作用機(jī)理 化學(xué)進(jìn)展 賈俊超 馬琳 范志金 等 病原菌對(duì) 類殺菌劑抗 藥性機(jī)理的研究進(jìn)展 農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào)