150 150 實(shí)驗(yàn)研究 不同干熱處理對西瓜種子帶菌量的研究 李 曼 河北省衡水市武邑縣職教中心 河北 衡水 053400 摘 要 本實(shí)驗(yàn)以西瓜品種 懶漢地瓜王 種子為材料 研究 65 70 75 不同溫度干熱處理 24 h 后對西瓜種 子帶菌量的影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明 適宜的干熱處理對表面帶菌的種子滅菌率非常明顯 隨著處理溫度的不 斷升高西瓜種子的帶菌量明顯降低 同一溫度下 不同濃度梯度之間細(xì)菌數(shù)量成一定的倍比關(guān)系 同一濃 度下 不同溫度之間細(xì)菌數(shù)量差異性也十分顯著 65 70 75 三個溫度處理的滅菌率分別是 57 80 95 因此綜合考慮西瓜同一時間不同溫度對滅菌率的影響 適宜于西瓜種子干熱處理的最佳組合是 75 處理 24 h 本實(shí)驗(yàn)為干熱處理廣泛應(yīng)用在減少西瓜種子帶菌量提供了一些理論依據(jù) 關(guān)鍵詞 溫度 干熱處理 西瓜 種子活力 文章編號 ISSN2096 0743 2021 09 0150 1 材料與方法 1 1 供試材料 1 1 1 供試西瓜種子 懶漢地瓜王 西瓜種子 千瑞種業(yè)公司生產(chǎn) 1 1 2 供試培養(yǎng)基 NA 培養(yǎng)基 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g 氯化鈉 5g 瓊脂 an20g 1000ml 水 NB 培養(yǎng)基 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g 氯化鈉 5g 1000ml 水 1 2 實(shí)驗(yàn)儀器 滅菌鍋 SQ810C 恒溫培養(yǎng)箱 BSG 250 搖床 HNY 2102C 干燥箱 DZF 6090 1 3 實(shí)驗(yàn)方法 1 3 1 西瓜種子的處理 采用干熱處理法將種子在陽光下暴曬 使其充分干 燥 然后在恒溫干燥箱內(nèi)進(jìn)行處理 準(zhǔn)備 3 個干燥箱 設(shè) 65 70 75 3 個溫度處理 每處理 3 次重復(fù) 每重 復(fù) 3 粒種子 將種子置于滅菌培養(yǎng)皿中 干燥箱內(nèi)烘干 24h 對照 CK 為不經(jīng)過干熱處理的種子 1 3 2 培養(yǎng)基的選擇 采用了水和 NB 培養(yǎng)液兩種培養(yǎng)液對本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了研 究 用平板涂布法對兩種培養(yǎng)液培養(yǎng)出的菌落進(jìn)行了比較 實(shí)驗(yàn) 根據(jù)得出的結(jié)果 在正式實(shí)驗(yàn)中選用 NB 培養(yǎng)基更 加合理 確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和嚴(yán)謹(jǐn)性 1 3 3 菌懸液的培養(yǎng) NA 和 NB 培養(yǎng)基的配制方法是將幾種物質(zhì)分別稱量 后放入 1000 ml 燒杯中 按比例加水 定容 攪勻 分裝 放入 121 高壓滅菌鍋中滅菌 15 min 干熱處理后的種子 在超凈工作臺中接到滅好菌的三角瓶中 超凈作臺紫外線 滅菌 15 分鐘 滅菌結(jié)束后吹風(fēng) 10 分鐘左右后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操 作 采用振蕩培養(yǎng)法將不同溫度干熱處理后的種子加入到 滅菌的 NB 培養(yǎng)液中 160 rpm 的搖床中振蕩培養(yǎng) 24 h 1 3 4 西瓜種子帶菌量的測定 將滅菌凝固后的 NA 培養(yǎng)液在微波爐內(nèi)加熱 直至 呈液態(tài) 在超凈工作臺中倒入培養(yǎng)皿中 然后吸取 1 ml 菌懸液依次稀釋 10 1 10 2 10 3 10 4 和 10 5 倍 再從 10 3 10 4 10 5 的稀釋液中取 100 L 在培養(yǎng)基上涂板 用三角玻璃環(huán)涂勻 每個處理 3 皿 以未進(jìn)行干熱處理的 種子作為對照 待涂好板的培養(yǎng)基表面風(fēng)干后 倒置于 28 恒溫培 養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng) 24 h 觀察并用活細(xì)胞計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù) 100 對照滅菌數(shù) 處理滅菌數(shù) 對照滅菌數(shù) 滅菌效果 1 4 數(shù)據(jù)處理 用 Excel 2007 軟件對所有數(shù)據(jù)進(jìn)行整理作圖 并將得 到的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用 SPSS 22 0 進(jìn)行分析 2 結(jié)果與分析 2 1 培養(yǎng)基質(zhì)的測定結(jié)果 為了保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和嚴(yán)謹(jǐn)性 我們采用了以水和 NB 培養(yǎng)液兩種培養(yǎng)液對本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了研究 用平板涂布 法對兩種培養(yǎng)液培養(yǎng)出的菌落進(jìn)行了比較實(shí)驗(yàn) 結(jié)果如圖 3 1 所示 NB培養(yǎng)液 水 圖3 1 選擇培養(yǎng)液對照 從兩種培養(yǎng)液的成分來看 其中 NB 培養(yǎng)液含有牛肉 膏 蛋白胨 氯化鈉 營養(yǎng)成分相對較多 為菌落生長提 151 151 實(shí)驗(yàn)研究 供了較好的環(huán)境 而以水作為培養(yǎng)液 沒有營養(yǎng)成分 菌 落生長緩慢 得出的結(jié)果顯而易見 NB 培養(yǎng)液生長出來 的菌落非常多 而水培養(yǎng)出來的菌落比較稀少 綜上 NB 培養(yǎng)液是適合本實(shí)驗(yàn)的培養(yǎng)液 但是菌落數(shù)量龐大 需要對菌懸液進(jìn)行更大的倍比稀釋 保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性 2 2 不同溫度干熱處理下對種子帶菌量的測定 在預(yù)備實(shí)驗(yàn)中 我們選擇了 10 1 10 2 10 3 得到的 細(xì)菌菌落非常多 難以統(tǒng)計(jì) 二次實(shí)驗(yàn) 在制備菌懸液時 沒有選用培養(yǎng)液培養(yǎng) 雖然滅菌率顯著 但是得到的結(jié)果 沒有對比性 在我們不斷的測試中 選擇了在制備菌懸液 時選擇 NB 培養(yǎng)液 然后選擇 10 3 10 4 10 5 的稀釋液 得到的數(shù)據(jù)如表 表3 1 處理后種子帶菌數(shù)量 溫度 濃度 重復(fù) 1 個 重復(fù) 2 個 重復(fù) 3 個 平均數(shù)量 個 65 10 3 47500 45800 47700 47000 10 4 4200 4450 4850 4500 10 5 465 450 485 366 70 10 3 13500 15400 14900 14600 10 4 1300 1450 1750 1500 10 5 165 180 150 166 75 10 3 3950 4300 4150 4100 10 4 400 375 365 380 10 5 40 21 39 33 CK 10 3 78000 86000 89500 84500 10 4 7900 8300 900 8400 10 5 850 915 920 895 如表 3 1 所示 6 5 7 0 和 7 5 各個溫度下的 10 3 10 4 10 5 三個濃度梯度細(xì)菌數(shù)量由低到高成一定的 倍比關(guān)系 符合實(shí)驗(yàn)結(jié)果的發(fā)展規(guī)律 同一濃度下 各個 溫度梯度細(xì)菌的數(shù)量差異性也非常顯著 在 65 24 h 干熱處理下 西瓜種子帶菌量還較高 與對照相比 滅菌率 57 在 70 24 h 干熱處理溫度下 西瓜種子帶菌量顯著降低 滅菌率 80 在 75 24 h 干 熱處理溫度下 西瓜種子滅菌已經(jīng)非常明顯 滅菌率高達(dá) 95 以 10 5 為例 用 SPSS22 0 做方差分析 結(jié)果如下表 表3 2 10 5 濃度下菌落個數(shù)分析 溫度 重復(fù) 1 個 重復(fù) 2 個 重復(fù)3 個 均數(shù) 個 標(biāo)準(zhǔn)差 P 0 05 65 465 450 485 466 67 17 56 a 70 165 180 150 165 00 15 b 75 40 21 39 33 33 10 69 c CK 850 915 920 895 00 39 05 注 在 P 0 05 水平上同列數(shù)據(jù)后標(biāo)不同小寫字母 表示差異顯著 以 10 5 濃度做方差分析研究不同干熱處理對西瓜種 子帶菌量影響的結(jié)果表明 如表 3 2 所示 65 70 和 75 的處理和對照比較均有顯著性差異 同一時間下三個 溫度的干熱處理對西瓜種子帶菌量均有不同程度的影響 其中 75 24 h 干熱處理溫度對西瓜種子帶菌量抑制 效果最顯著 平均細(xì)菌數(shù)量 33 個 其次是 70 24 h 對其 的抑制效果 平均細(xì)菌數(shù)量 165 個 與對照組相比效果最 差的是 65 24 h 的處理 其平均細(xì)菌數(shù)量還存在 467 個 帶菌量檢測結(jié)果表明 同一時間下不同溫度組合干熱 處理對種子表面病菌的滅菌率明顯 隨著干熱處理溫度升 高 滅菌率明顯增加 帶菌量下降 表明西瓜種子帶菌量 隨著干熱處理溫度升高呈顯著降低趨勢 3 結(jié)論與討論 3 1 結(jié)論 由上面得到的結(jié)果表明 懶漢地瓜王 西瓜種子 經(jīng) NB 培養(yǎng)液培養(yǎng)后 干熱處理對西瓜種子的滅菌率明 顯 隨著干熱處理溫度升高 滅菌率明顯 65 70 和 75 三個處理溫度的滅菌率分別是 57 80 和 95 所以 在實(shí)際生產(chǎn)中 75 24 h 的干熱處理是最適宜西 瓜種子的處理 本實(shí)驗(yàn)為干熱處理廣泛應(yīng)用在減少西瓜種 子帶菌量提供了一些理論依據(jù) 3 2 討論 現(xiàn)有選擇的培養(yǎng)基在種子實(shí)際帶菌量較低的情況下 由于培養(yǎng)基的靈敏度有限或?qū)嶒?yàn)不規(guī)范導(dǎo)致培養(yǎng)基上長出 來的全部是假陽性菌落 常?？赡軐?dǎo)致檢測不到真實(shí)的病 菌 導(dǎo)致錯誤檢測結(jié)果 所以注意自身安全 規(guī)范實(shí)驗(yàn)操 作 減少實(shí)驗(yàn)誤差 在研究中發(fā)現(xiàn)控制和消除病害的早期 污染源是預(yù)防植物病害的關(guān)鍵技術(shù) 但目前還沒有發(fā)現(xiàn)發(fā) 生西瓜病害的流行規(guī)律 病害的早期污染源等 有研究結(jié) 果表明 由于感染病菌的主要原因是接種源是感染病菌的 種子 但是 關(guān)于病菌的種子的帶菌機(jī)制的研究還沒有完 善 通過什么方法處理帶菌的種子是最有效的 這些都是 生產(chǎn)上待解決的問題 今后西瓜的重要種傳病害研究方向集中于以下幾個方 面 深入了解種子如何感染病菌 病菌的種子傳播和生存 機(jī)制 有助于完善種子檢測的規(guī)程和處理種子的技術(shù) 現(xiàn) 在的檢測方法在應(yīng)用中各有優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn) 發(fā)展快速 準(zhǔn)確 的可以確認(rèn)病菌的活力的高質(zhì)量檢測方法 在種子處理中 找到能夠提高種子的活力和易于操作 普及的方法同時有 效地去除西瓜種子內(nèi)部的病菌 建立完善的種子采后保存 處理規(guī)程 參考文獻(xiàn) 1 浙江農(nóng)業(yè)大學(xué)主編 蔬菜栽培學(xué)各論 M 北京 中國農(nóng)業(yè) 出版社 2000 2 李逸龍 西瓜種傳細(xì)菌性果斑病的快速檢測及種子消毒 方法的研究 D 上海 華東師范大學(xué) 2016