甜瓜細(xì)菌性果斑病病菌鑒定及不同材料抗病性測定 劉夢華 盧霞 李騰 李永博 樊文義 司龍亭 李文虎 阿門 江蘇綠港現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司 江蘇宿遷 摘要 為明確近幾年江蘇地區(qū)甜瓜葉片及瓜上發(fā)生的某一細(xì)菌性病害 以江蘇綠港現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司設(shè)施大棚中甜瓜發(fā)病葉片為 研究對象 經(jīng)分離純化得到菌株LG 觀察病菌形態(tài)初步判定該病原菌為甜瓜細(xì)菌性果斑病菌 為進(jìn)一步明確該病菌 分別用 對細(xì)菌 性果斑病菌通用標(biāo)記 BX BX S RC和WFB 對甜瓜細(xì)菌性果斑病菌特異性標(biāo)記 c c c 及 6S測序進(jìn)行分析 結(jié)果表明 菌株LG 為燕麥?zhǔn)人峋鞴蟻喎N Acidovorax avenae subs citrulli 苗期和坐果期對西甜瓜部分材料接種菌株LG 結(jié)果發(fā) 現(xiàn)菌株LG 對西甜瓜都有致病性 該研究不僅有利于進(jìn)一步了解甜瓜細(xì)菌性果斑菌的特性 為果斑病的防治提供參考 而且也有助于 甜瓜抗病品種的選育 關(guān)鍵詞 甜瓜 細(xì)菌性果斑病菌 分離純化 抗病材料 中圖分類號 S 6 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 文章編號 66 6 doi 6 j issn 66 6 開放科學(xué) 資源服務(wù) 標(biāo)識碼 OSID Identification of Bacterial Fruit Blotch Pathogen and Detection of Different Resistant Plant Materials in Melon LIU Meng hua LU Xia LI Teng et al i ngsu G een o ode n g icu u e Deve o men Co L d Suqi n i ngsu Abstract To iden ify e ogen c using e ves nd f ui s dise se in me on ese ye s in i ngsu P ovince dise sed m e i s we e s m ed f om so g een ouse of i ngsu G een o ode n g icu u e Deve o men Co L d n is s udy e iso ed ogen n med LG w s u ified nd ini i y iden ified s me on B c e i F ui B o c BFB ogen b sed on i s co onies mo o ogic c c e iz ion Fu e fou i s of common y used BFB m ke s BX BX S RC nd WFB s we s ee i s of me on s ecific BFB m ke s c c nd c we e used fo mo ecu c c e iz ion n ddi ion D sequencing of LG w s e fo med b sed on 6S m ified f gmen s Toge e LG w s u im e y confi med s s in of Acidovorax avenae Subs citrulli c w s found LG w s o genic o me on nd w e me on u on inocu ing i o some of ei n s m e i s du ing seed ing nd f ui se ing e iod T is s udy no on y e s o mo e unde s nding e c c e is ics of BFB bu so ovides esis n ines o me on b eeding og m w i e cons i u ing efe ence fo e even ion nd e men of BFB Key words e on B c e i f ui b o c so ion nd u ific ion Resis n m e i s 基金項(xiàng)目 年宿遷市產(chǎn)業(yè)發(fā)展引導(dǎo)資金 自然科學(xué)資金 K 作者簡介 劉夢華 女 河南洛陽人 助理農(nóng)藝師 從事分子輔 助育種和種子純度鑒定研究 盧霞 女 甘肅天水 人 助理農(nóng)藝師 碩士 從事分子輔助育種和種子純度鑒定 研究 劉夢華和盧霞為共同第一作者 通信作者 副研 究員 博士 從事作物遺傳育種研究 收稿日期 6 甜瓜 Cucumis melo 為葫蘆科甜瓜屬一年生蔓性草本植 物 是我國最早利用為果品的瓜類 世界各地廣泛栽培 我 國甜瓜栽培面積也在逐漸增加 但隨著全球氣候變暖及設(shè)施 大棚的普及 甜瓜病害的種類也逐年增多 其中細(xì)菌性果斑 病對甜瓜的危害特別嚴(yán)重 造成甜瓜大范圍的減產(chǎn)甚至絕 產(chǎn) 該病最早于 6 年在佛羅里達(dá)州發(fā)現(xiàn) 年 Sc d等 將其病原菌鑒定為西瓜燕麥?zhǔn)人峋?Acidovorax citrulli 劉丹丹等 通過在LB培養(yǎng)基上培養(yǎng)該病原菌 后觀察其形態(tài)呈圓形 直徑 mm 乳白色 半透明 光滑菌 落 李俊閣等 對甜瓜苗期接種果斑病菌 發(fā)現(xiàn)該病害發(fā)病 初期子葉出現(xiàn)水漬狀病斑 從葉脈開始發(fā)展直至葉片失綠 病斑周圍有黃色暈圈或壞死 于海博等 6 在遼寧西甜瓜上 也發(fā)現(xiàn)細(xì)菌性果斑病 該病害不僅危害西甜瓜葉片 而且也 危害果實(shí) 在葉片上初期為水漬狀病斑 后逐漸壞死且病斑 周圍有黃色暈圈 果實(shí)感病時(shí) 初期呈綠褐色水漬狀病斑 隨 后病斑擴(kuò)大病菌侵入果肉組織造成水浸狀 褐腐或木栓化 6年 cks in Leiv等 在以色列甜瓜上發(fā)現(xiàn)細(xì)菌性果斑 病菌株 6 年P(guān) k等 在韓國西瓜上也發(fā)現(xiàn)了該細(xì) 菌性果斑病菌株K CC 我國海南 新疆 內(nèi)蒙 古 山東 等地區(qū)也都在西甜瓜上發(fā)現(xiàn)并分離出該病原 菌 但江蘇地區(qū)很少報(bào)道 甜瓜細(xì)菌性果斑病具有發(fā)病迅 速 傳播速度快 暴發(fā)性強(qiáng) 防病難等特點(diǎn) 已成為影響我國 瓜類生產(chǎn)的主要病害之一 對甜瓜生產(chǎn)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損 失 該病原菌可通過傷口和氣孔侵染瓜類子葉和果實(shí) 高溫 高濕極易發(fā)病 一旦發(fā)病將難以控制 如何有效地防治細(xì) 菌性果斑病成為生產(chǎn)中的重中之重 目前我國主要通過化 學(xué)藥劑防治細(xì)菌性果斑病 但使用的大部分農(nóng)藥效果不是很 理想 且對環(huán)境污染較大 容易產(chǎn)生抗藥性 所以篩選果斑 病抗性品種是廣大育種工作者目前亟待解決的問題 隨著分子生物學(xué)和生物信息學(xué)的發(fā)展 許多用于細(xì)菌種 類鑒定的分子標(biāo)記被開發(fā) 利用這些分子標(biāo)記能夠快速 準(zhǔn) 確地檢測和鑒定該病原菌 韓盛等 使用擴(kuò)增細(xì)菌 TS序列 的通用引物L(fēng) L 證實(shí)引起新疆甜瓜發(fā)病的 個(gè)病原菌均 為嗜酸菌燕麥西瓜亞種 Acidovorax avenae subs citrulli 吉 訓(xùn)聰?shù)?使用細(xì)菌通用引物 6S D 將甜瓜菌株鑒定為嗜 酸菌燕麥西瓜亞種 Acidovorax avenae subs citrulli Wi ems 年B 等 用 對分子標(biāo)記BX BX S RC鑒定葫 蘆科細(xì)菌性果斑病菌 年W co 等 用分子標(biāo)記WFB 鑒定細(xì)菌性果斑病菌 年 s m等 用 對分子標(biāo)記 c c 和 c 鑒定甜瓜細(xì)菌性果斑病菌 筆者 以發(fā)病甜瓜葉片為研究對象 通過病菌分離純化 形態(tài)學(xué)觀 察 分子標(biāo)記檢測及 6S R 基因測序分析等方法 鑒定所 分離的甜瓜葉片病原菌 并通過致病性接種檢測試驗(yàn)篩選出 抗病的甜瓜種質(zhì)資源 為甜瓜育種提供參考 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) n ui g ic Sci 6 1 材料與方法 1 1 試驗(yàn)材料 1 1 1 甜瓜細(xì)菌性果斑病標(biāo)本的采集 年 月在江蘇 綠港現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司 簡稱 江蘇綠港 拱棚采集病葉 帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行分離純化 1 1 2 西甜瓜材料 哈密瓜類 份 玉菇類 份 羊角脆類 型 份 厚皮甜瓜 份 薄皮甜瓜 份 西瓜 份材料均由 江蘇綠港育種研究所提供 供試材料定植于單棟拱棚 依照 江蘇綠港西甜瓜作物栽培管理標(biāo)準(zhǔn)體系進(jìn)行栽培管理 1 1 3 培養(yǎng)基 分離培養(yǎng)用K B固體培養(yǎng)基 g胰蛋白 胨 g硫酸鎂 g丙三醇 g瓊脂 g磷酸氫二鉀 定 容至 mL H 搖菌用 B液體培養(yǎng)基 g牛肉膏 g蛋白胨 定容至 mL H 1 2 試驗(yàn)方法 1 2 1 病原菌分離 純化 將采集的病葉用自來水沖洗病斑 表面 晾干 在生物安全柜中用已滅菌的剪刀將葉片病健交 界處組織剪至 mm片段 先用 乙醇沖洗 s 無菌水 沖洗 s 重復(fù) 次 晾干 將葉片組織放在K B固體培養(yǎng) 基上 每皿 6片組織 恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng) 用 L滅菌的槍頭挑取葉片邊緣的菌落至新的K B固體培 養(yǎng)基上 劃線培養(yǎng) 放入 恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng) 選取單 菌落進(jìn)行純化培養(yǎng) 挑單菌落至加入氨芐抗生素的K B固 體培養(yǎng)基上劃線培養(yǎng) 如此重復(fù) 次 挑取單菌落至加入氨 芐抗生素的 B液體培養(yǎng)基中搖菌 置于 min恒 溫振蕩培養(yǎng)箱培養(yǎng) 將純化后的菌株保存在冰箱 中待用 1 2 2 病原菌形態(tài)觀察 將分離純化后的菌株接種于K B 培養(yǎng)基上 于 恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 觀察菌落形態(tài) 大小 透明度及表面光滑程度等性狀 1 2 3 病原菌PCR檢測 PCR擴(kuò)增時(shí)采用的反應(yīng)體系為 L體系 其中菌液 L Taq s e ix Dye L 正反引物各 L 加入滅菌的超純水至 L PCR反應(yīng)程 序 預(yù)變性 min 然后進(jìn)行 個(gè)循環(huán) 每個(gè)循環(huán)包括 變性 s 退火 s 延伸 s 最后延伸 min 置于 保存 PCR檢測時(shí)引物 表 為 對細(xì)菌性 果斑病菌通用標(biāo)記 BX BX S RC和WFB 及 對甜瓜細(xì) 菌性果斑病菌特異性標(biāo)記 c c c PCR 產(chǎn)物在加有溴化乙錠 B 的 瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳 電泳 緩沖液為 T 緩沖液 電壓為 v 電泳結(jié)束后在凝膠 成像分析儀中觀察電泳條帶 在 6 nm波長下分析D 電 泳條帶大小 掃描圖像并保存 1 2 4 6S R 擴(kuò)增及基因測序分析 用細(xì)菌通用引物 F G GTTTG TCCTGGCTC G 和 R GGT T CCTTGTT CG CTT 對分離病菌進(jìn)行PCR擴(kuò)增 PCR 反應(yīng)體系 L 菌液 L Taq s e ix Dye L 正反引物各 L 加入滅菌的超純水至 L PCR 反應(yīng)程序 預(yù)變性 min 然后進(jìn)行 個(gè)循環(huán) 每個(gè)循環(huán)包 括 變性 s 退火 s 延伸 s 最后延伸 min 反應(yīng)結(jié)束后 吸取 L在 的瓊脂糖凝膠電泳上 檢測 表1 用于檢測果斑病菌的PCR引物和反應(yīng)條件 Table 1 Sequence of primer pairs used for detection of A citrulli strains causing BFB disease based on polymerase chain reac tion PCR assays 標(biāo)記名稱 P ime n me 序列 P ime sequence 標(biāo)記大小 m icon size b 退火溫度 nne ing condi ion BX F C GCTGGG GCG TCTTC T R C TG GGGGT GGCC GGT 6 BX S F C GCTGGG GCG TCTTC T R GCGTC GG GGGTG GT GC RC F CGGTCTTCG CCTG CGCT R C GCTTCTTTCCC GC C WFB F G CC GCC C CTGGG C R CTGCCGT CTCC GCG T 6 c F GC TCCGGTGTGCTGCTGG R G G TGTC G GTCGC CGGT 6 c F GGCGG C TGGGTTGGCT R CTGCGCCTGCGCCC C CC c F TCGCGGGCCGTG TGTTCCG R TGG CTTCGGGTGGGCCTTC 用PCR產(chǎn)物純化試劑盒純化回收PCR產(chǎn)物 與 D T載體連接 連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH 感受態(tài)細(xì)胞 篩選陽性克隆 PCR法鑒定是否含有外源目標(biāo)插入片段 將 含有目標(biāo)D 的轉(zhuǎn)化子進(jìn)行測序 測序工作由杭州尚亞塞 生物技術(shù)有限公司完成 利用D 生物信息學(xué)軟件 對獲得的序列進(jìn)行比對 1 2 5 致病性測定及甜瓜材料抗性鑒定 將分離純化的菌 株在 B液體培養(yǎng)基中搖菌 待搖渾后 將菌株配成 CFU mL的菌懸液 隨機(jī)選取 份甜瓜材料 份西 瓜材料進(jìn)行致病性測定和甜瓜抗性試驗(yàn) 每份材料播種 粒 兩葉一心定植 甜瓜和西瓜緩苗結(jié)束后 在苗齡為 6葉 期時(shí) 將菌懸液用噴霧法接種至西甜瓜葉片上 以無菌水噴 霧作對照 接種后加大棚內(nèi)的溫濕度 隔 d觀察記錄發(fā) 病情況 2 結(jié)果與分析 2 1 病害癥狀 江蘇綠港甜瓜田間調(diào)查發(fā)現(xiàn) 感病甜瓜初期 葉片出現(xiàn)不規(guī)則褐色斑點(diǎn) 葉脈先發(fā)病逐漸向整個(gè)葉片蔓 延 果實(shí)癥狀比較明顯 初期出現(xiàn)水漬狀病斑 逐漸擴(kuò)大成水 漬狀大斑 侵入果肉引起果肉腐爛 圖 和b 2 2 菌株形態(tài)特征 將所采病樣 份經(jīng) 次單菌落的分離 純化 通過菌落形態(tài)觀察 結(jié)果得到 株菌株 編號為LG 菌株在K B培養(yǎng)基上形成多菌落 且菌落形態(tài)單一 菌落 呈凸?fàn)?光滑至略帶顆粒 乳白色 邊緣帶半透明 圖 c 2 3 分子鑒定 為了明確分離得到的菌株LG 是否是瓜 類細(xì)菌性果斑病 利用 對細(xì)菌性果斑病通用標(biāo)記BX BX S RC WFB對菌株LG 進(jìn)行PCR擴(kuò)增 經(jīng)瓊脂糖凝膠電 泳分別擴(kuò)增出 6 6 b 的條帶 圖 d 且?guī)颓?晰 該結(jié)果與之前報(bào)道的結(jié)果一致 表明菌株LG 為細(xì)菌性 果斑病菌 為了進(jìn)一步驗(yàn)證其是否為甜瓜細(xì)菌性果斑病菌 6 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 年 利用 對甜瓜細(xì)菌性果斑病特異性標(biāo)記 c c c 對菌株LG 進(jìn)行PCR擴(kuò)增 其結(jié)果與之前文獻(xiàn)報(bào) 道的結(jié)果一致 同樣擴(kuò)增出了大小分別為 b 清 晰片段 圖 e 注 BX BX S RC WFB 6S 6 c c c 圖1 甜瓜細(xì)菌性果斑病分離純化和PCR鑒定 Fig 1 Isolation purification and PCR identification of BFB pathogen 2 4 16S rRNA基因測序分析 對菌株LG 的 6S D 序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增 獲得了 b 的PCR產(chǎn)物 圖 d 將PCR產(chǎn)物回收測序 測序結(jié)果通過 CB 數(shù)據(jù)庫進(jìn)行 BL ST同源性比對 s b s ncbi n m ni gov B s cgi 菌株LG 與已報(bào)道的燕麥?zhǔn)人峋鞴蟻喎N具有高度 同源性 即與K CC 序列同源性達(dá) 與 C 和 6 序列同源性高達(dá) 說明菌株LG 也屬 于燕麥?zhǔn)人峋鞴蟻喎N A avenae subs citrulli 2 5 病原菌的致病性鑒定及甜瓜抗性鑒定 將菌株LG 分別在苗期和坐果期接種到西甜瓜上 d后觀察西甜瓜葉 片均有發(fā)病 且發(fā)病癥狀與上述描述的甜瓜細(xì)菌性果斑病的 癥狀一致 圖 再次對西甜瓜發(fā)病葉片和果實(shí)進(jìn)行分離 純化 得到與菌株形態(tài)特征相同的菌株 表明菌株LG 可能 為細(xì)菌性果斑病病原菌 注 b c為甜瓜抗病材料 d e f為甜瓜感病材料 g 為西瓜感病材料 o e b c Resis n me on n m e i s d e f Susce ib e me on n m e i s g Susce ib e w e me on n m e i s 圖2 甜瓜和西瓜材料致病性檢測結(jié)果 Fig 2 Result of inoculation test of melon and watermelon materials 由表 可知 在所有供試甜瓜類型中發(fā)病情況有明顯的 差別 哈密瓜類型的 份材料 都表現(xiàn)出感病 玉菇類 的 份材料中 有 份表現(xiàn)出不同程度的抗病情況 份表 現(xiàn)感病 有可能因?yàn)檫@ 份感病材料與其他 份玉菇類的 材料無親緣關(guān)系 羊角脆類型的 份材料中 份表現(xiàn)出不同 程度的抗病性 份表現(xiàn)出感病 這主要是由于個(gè)體存在差異 性 其他 份薄皮甜瓜均表現(xiàn)出抗性 總體而言 甜瓜薄皮 系列 玉菇類具有較強(qiáng)的抗性 哈密瓜類型比較容易感病 由于厚皮甜瓜類型多 控制甜瓜性狀的基因也多 其抗感性 不易確定 3 結(jié)論與討論 甜瓜細(xì)菌性果斑病主要侵染甜瓜的植株 果實(shí)和種子 造成苗期死亡或者果實(shí)腐爛等嚴(yán)重現(xiàn)象 對甜瓜育種及生產(chǎn) 者造成巨大的影響 該研究采集江蘇綠港疑似甜瓜細(xì)菌性 果斑病病葉 份 對其進(jìn)行分離純化 獲得 株菌株LG 用 對細(xì)菌性果斑病相關(guān)標(biāo)記BX BX S RC WFB c 卷6期 劉夢華等 甜瓜細(xì)菌性果斑病病菌鑒定及不同材料抗病性測定 表2 甜瓜細(xì)菌性果斑病抗性測定結(jié)果 Table 2 Test results of melon BFB disease resistance 類型 Ty e 甜瓜材料 e on m e i s 抗性 Resis nce 類型 Ty e 甜瓜材料 e on m e i s 抗性 Resis nce 羊角脆類 C unc y me on L R 哈密瓜類 C n ou e L S L S L S L S L S L 6 R L S L R L S L R L 6 S L R L S 玉菇類 Yugu musk me on L R L S L R L S L R L R L 6 R 厚皮甜瓜 T ick skinned muskme on L R L R L S L 6 R L S L 6 R L R L R L R L R L R L S L S L S L S L S L S L S L R L S薄皮甜瓜 T in skinned muskme on L R L R L R L R L R L R L R L S L S 注 R 高抗 R 抗 R 低抗 S 高感 S 感 o e R Hig esis nce R Resis nce R Low esis nce S Susce ibi i y S Hig susce ibi i y c 及 c 對菌株LG 進(jìn)行PCR擴(kuò)增檢測 PCR擴(kuò) 增產(chǎn)物經(jīng)過瓊脂糖凝膠電泳 均顯示出清晰條帶 且經(jīng) 6S D 測序分析結(jié)果表明該菌株LG 與之前西瓜上分離出 的 CC K C 菌株和甜瓜上分離出的 6菌株均 具有高度的同源性 將分離純化得到的菌株LG 回接到健 康甜瓜 西瓜幼苗上 接種結(jié)果表明 該菌株LG 能引起健 康甜瓜 西瓜植株發(fā)病 筆者對接種后發(fā)病西甜瓜植株葉片 再次分離純化 得到與菌株LG 在菌落形態(tài)等方面一致的 菌株 且發(fā)病葉片癥狀與田間發(fā)病癥狀相同 由此確定該菌 株LG 可能是引起江蘇地區(qū)西甜瓜的細(xì)菌性果斑病菌 s m等 利用其自主開發(fā)的 對甜瓜細(xì)菌性果斑病特異的 標(biāo)記 c c 和 c 對甜瓜菌株 HHS 和K CC 進(jìn)行PCR擴(kuò)增檢測 發(fā)現(xiàn)其能擴(kuò)增出清晰的 目標(biāo)片段 田間接種甜瓜 西瓜等材料 結(jié)果只在甜瓜上發(fā) 病 而在西瓜上不發(fā)病 因此 s m等 認(rèn)為菌株 HHS 和K CC 對甜瓜具有高度毒性而對西瓜基本無毒 性 s m等 用同樣的 對標(biāo)記對 株西瓜菌株 CC K C 也進(jìn)行了PCR擴(kuò)增 未擴(kuò)增出目標(biāo)條帶 而該 研究發(fā)現(xiàn) 用 對 s m等 開發(fā)的標(biāo)記 c c c 對LG 進(jìn)行PCR擴(kuò)增 均擴(kuò)增出了目標(biāo)片段 且與 s m等 從甜瓜上分離菌株 HHS 和K CC 擴(kuò)增的條帶大小相同 且田間接種試驗(yàn)表明該菌株LG 不 僅能侵染甜瓜而且能引起西瓜發(fā)病 該研究利用標(biāo)記 6S 僅對保守細(xì)菌基因進(jìn)行測序 而不是對整個(gè)基因組進(jìn)行測 序 因此序列相似性結(jié)果可能會產(chǎn)生偏差 從而影響序列分 析的可靠性 將PCR檢測 6S序列分析以及田間致病性結(jié) 果綜合起來 菌株LG 可能與菌株 HHS 和 K CC 相同或存在差異 另外 試驗(yàn)條件和材料背景也可 能會影響菌株的致病性 為了篩選抗細(xì)菌性果斑病的甜瓜種質(zhì)資源 該研究對 份甜瓜材料接種菌株LG 進(jìn)行致病性檢測 觀察苗期發(fā)病 情況 在供試的甜瓜材料中 甜瓜類型與抗性之間存在一定 差異 哈密瓜類比較容易感病 玉菇類甜瓜總體上都表現(xiàn)出 一定的抗病性 羊角脆類甜瓜中 抗病 其中有 份材料 表現(xiàn)感病 可能因?yàn)閭€(gè)體的差異性 由于環(huán)境及設(shè)施條件可 能達(dá)不到菌株最適宜的生長環(huán)境 抗感材料觀察結(jié)果可能會 有一定的誤差 后期會進(jìn)一步克服外界因素 進(jìn)行大規(guī)模甜 瓜抗性篩選試驗(yàn) 該研究可為甜瓜細(xì)菌性果斑病抗病基因 QTL定位奠定基礎(chǔ) 將來可以選取更多甜瓜材料 包括該研 究中已選擇的材料 設(shè)計(jì) 種不同的甜瓜栽培模式 露地栽 培 日光溫室栽培和拱棚栽培 進(jìn)行大規(guī)模的甜瓜抗性篩選 試驗(yàn) 參考文獻(xiàn) 魯思夢 王賢磊 寧雪飛 等 甜瓜 R 細(xì)菌性果斑病抗病基因QTL 定位分析 分子植物育種 CR LL SCH CK C B c e i f ui o of w e me on in F o id P n dise se e o e 6 SCH D W POST KO S CHL R e Rec ssific ion of subs ecies of Acidovorax avenae s A avenae nns emend A cattleyae P v ino comb nov A citrulli Sc d e comb nov nd o os of A oryzae s nov Sys em ic nd ied mic obi o ogy 6 6 劉丹丹 劉暢 甜瓜細(xì)菌性果斑病菌鑒定及殺菌劑毒力測定 北方園 藝 6 李俊閣 王惠林 張亮 等 種子接種果斑病菌對不同甜瓜幼苗生長的影 響 北方園藝 6 6 于海博 畢馨月 夏博 等 遼寧西瓜和甜瓜細(xì)菌性果斑病的病原鑒定 沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào) CKSHT L SHK DY D G RSHO TS e nsig s f om e genome sequence of Acidovorax citrulli 6 g ou s in of e c us gen of b c e i f ui b o c of cucu bi s F on ie sin mic obio ogy 6 P RK H S O G H SUL W e Com e e genome sequence of Aci dovorax citrulli s in K CC c us gen fo b c e i f ui b o c on w e me on Ko e n jou n of mic obio ogy 吉訓(xùn)聰 肖彤斌 黃偉明 等 海南甜瓜細(xì)菌性果斑病病原菌鑒定 廣 東農(nóng)業(yè)科學(xué) 韓盛 楊渡 玉山江 麥麥提 等 新疆籽瓜細(xì)菌性果斑病的發(fā)生與分 子鑒定 新疆農(nóng)業(yè)科學(xué) 6 6 趙廷昌 趙洪梅 王懷松 山東省西瓜 甜瓜發(fā)生瓜類細(xì)菌性果斑病 植物保護(hù) B H R O FR T H D R e ew subs ecies s ecific o yme se c in e c ion b sed ss y fo e de ec ion of Acidovorax avenae sub s citrulli P n o ogy 6 W LCOTT R R G T T S R D De ec ion of Acidovorax avenae subs ci u i in w e me on seed using immunom gne ic se ion nd e o yme se c in e c ion P n dise se SL R HOSS R K H T e Deve o men of mo ecu m ke s fo de ec ion of Acidovorax citrulli s ins c using b c e i f ui b o c dise se in me on n e n ion jou n of mo ecu sciences 6 COP L D LUC S S L P DUS e Com e e sequence of Aci dovorax avenae subs citrulli C W nu C eek C US US DO oin Genome ns i u e 6 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 年