doi 10 19928 ki 1000 6346 2021 0014 大白菜細菌性角斑病抗性鑒定方法的建立 任峻輝 劉 焱 吉晶晶 陳志強 張耀偉 東北農(nóng)業(yè)大學園藝園林學院 黑龍江哈爾濱 150030 摘 要 近年來華北和東北地區(qū)大白菜細菌性角斑病的危害逐年加重 抗角斑病已成為大白菜育種的重要研究方向 但目前 尚未建立完善的大白菜抗細菌性角斑病鑒定方法 本試驗對哈爾濱市向陽鄉(xiāng)東北農(nóng)業(yè)大學實驗實習基地大白菜細菌性角斑病 病原菌進行分離鑒定 確定病原菌為丁香假單孢菌丁香致病型 Pseudomonas syringae pv syringae van Hall 以該分離物為 接種病原 以大白菜自交系 A224 1為試驗材料 采用 L 9 3 4 正交試驗設計 分析接種溫度 濕度 苗齡對細菌性角斑病 發(fā)病的影響 并以自交系 264 1 1 203 1及 331 1為試驗材料 篩選適宜的接種濃度 結(jié)果表明 苗齡 7 8葉期 接種溫 度 25 30 接種濕度 90 100 為大白菜細菌性角斑病發(fā)病的最佳條件組合 最佳接種濃度為 1 10 10 cfu mL 1 關(guān)鍵詞 大白菜 細菌性角斑病 抗病性鑒定 苗期細菌性角斑病發(fā)病的影響 以期建立大白菜細 菌性角斑病的抗性鑒定方法 為大白菜抗細菌性角 斑病種質(zhì)資源篩選以及抗病育種奠定基礎 1 材料與方法 1 1 試驗材料 大白菜細菌性角斑病病樣于 2018 年 8 月采自 哈爾濱市向陽鄉(xiāng)東北農(nóng)業(yè)大學實驗實習基地大白菜 育種譜地 供試大白菜為東北農(nóng)業(yè)大學園藝學院 選育的自交系 A224 1 感病 264 1 1 感病 203 1 耐病 及 331 1 抗病 1 2 試驗方法 1 2 1 細菌性角斑病病原菌分離 取發(fā)病株葉片 用清水沖洗干凈 在無菌環(huán)境下切取病健交界處 5 mm 5 mm 的小塊 浸入 70 乙醇中消毒 3 4 s 再用無菌水反復清洗 4 5次 每次清洗 3 min 然 后用滅菌玻璃棒將表面消毒后的病葉組織研碎 并 加入少量無菌水稀釋 用涂布棒蘸取菌液均勻涂在 KB 固體培養(yǎng)基上 放入 28 恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)進行培 養(yǎng) 待單菌落出現(xiàn) 挑取單菌落于 KB 液體培養(yǎng)基 中擴繁菌株 備用 張吉光 等 2010 1 2 2 病原菌分子鑒定 采用 16S rDNA 通用引物 1492R 5 AGAGTTTGATCCTGGCTCA 3 27F 5 GGTTACCTTGTTACGACTT 3 gyrB 基因 引物 UP 1E 5 TGTAAAACGACGGCCAGTGCNG 大白菜細菌性角斑病是猝發(fā)性病害 對大白菜 的產(chǎn)量及品質(zhì)影響較大 近年來該病害不僅發(fā)生得 愈加頻繁而且發(fā)病地域越來越廣泛 華北 東北地 區(qū)發(fā)生普遍 山東 河南 四川等地也均有發(fā)生 抗細菌性角斑病已成為大白菜育種的重要方向 抗 病育種需要有抗病種質(zhì)資源 簡單有效的接種鑒定 方法是鑒定資源抗病性的前提 也是抗病育種的基 礎 大白菜細菌性角斑病發(fā)現(xiàn)近 60 年 發(fā)病呈上 升趨勢 但至今還未見關(guān)于大白菜抗細菌性角斑 病鑒定方法的報道 細菌性角斑病的病原菌為丁香 假單孢菌 Pseudomonas syringae 能侵染多種蔬 菜作物 Bull et al 2004 2015 Harighi 2007 Takikawa Takahashi 2014 Nay et al 2019 生產(chǎn)中黃瓜細菌性角斑病發(fā)病相對較重 較早地建 立了黃瓜細菌性角斑病的抗性鑒定方法 關(guān)鐘燕 1990 馬柏壯 等 2013 本試驗研究了不同接種 溫度 接種濕度 接種苗齡以及接種濃度對大白菜 任峻輝 女 碩士研究生 主要從事蔬菜遺傳育種研究 E mail 525587774 通信作者 Corresponding author 張耀偉 男 研究員 博士生導 師 主要從事蔬菜遺傳育種的教學與科研工作 E mail zhyw1271 收稿日期 2020 01 23 接受日期 2020 04 17 基金項目 十三五 國家重點研發(fā)計劃子課題 2017YFD0101801 6 黑龍江省 百千萬 工程科技重大專項 2019ZX16B02 黑龍江省 蔬菜產(chǎn)業(yè)技術(shù)協(xié)同創(chuàng)新體系項目 HNWSCTX2019 64 中 國 蔬 菜 CHINA VEGETABLES 研究論文 2021 4 64 68 GRTCYTTYTCYTGRCA 3 APrU 5 CAGGAAA CAGCTATGACCAYGSNGGNGGNAARTTYRA 3 和 rpoD 基因引物 70R 5 ACGACTGACCCGGT ACGCATGTAYATGMGNGARATGGGNACNGT 3 70F 5 ACGACTGACCCGGTACGCATGTAYA TGMGNGARATGGGNACNGT 3 對菌株進行 PCR 擴增 Yamamoto et al 2000 擴增產(chǎn)物經(jīng) 1 瓊 脂糖凝膠電泳檢測 對單一 清晰的亮帶進行膠回 收 將膠回收產(chǎn)物與 Buffer 按 4 V 1 V混合 按上 述步驟再進行凝膠電泳 回收產(chǎn)物送華大基因科技 股份有限公司進行測序 測序結(jié)果與 NCBI 進行比 對 鑒定 1 2 3 大白菜細菌性角斑病抗性鑒定方法 采用 三因素三水平正交試驗設計 按 L 9 3 4 正交表 表 1 設置 9個處理 表 2 分析接種苗齡 濕 度及溫度對大白菜細菌性角斑病發(fā)病的影響 以噴 接無菌 KB 液體培養(yǎng)基作為對照 每處理 20 株 3 次重復 表 1 L 9 3 4 正交試驗因素水平表 水平 因素 A 接種苗齡 B 接種濕度 C 接種溫度 1 3 4葉期 50 60 15 20 2 5 6葉期 70 80 20 25 3 7 8葉期 90 100 25 30 將大白菜自交系 A224 1分 3期播種于 7 cm 7 cm 的營養(yǎng)缽中 每期間隔 5 d 每缽播 3粒 拉 十字期留 1株 置于日光溫室內(nèi) 晝 夜溫度控制 在 25 28 15 18 待幼苗分別長至 3 4葉 期 5 6 葉期 7 8 葉期進行接種試驗 為達到 最佳接種條件 接種試驗在人工氣候室中進行 病 原菌菌株用 KB 液體培養(yǎng)基擴繁 采用分光光度計 法測定細菌懸浮液濃度并稀釋到 1 10 8 cfu mL 1 采取噴接方式 每株選 1片幼葉進行接種并做好標 記 每株接種量 1 5 2 0 mL 接種后保濕 48 h 于接種 7 d 后調(diào)查發(fā)病情況 得到最佳接種苗齡 接種濕度及接種溫度后 將供試菌株配制成 3 個不同濃度菌液 1 10 8 1 10 10 1 10 12 cfu mL 1 分別接種于不同抗性 的 3個大白菜自交系 264 1 1 331 1和 203 1上 保濕 24 h 分別于接種后 7 10 d 調(diào)查發(fā)病情況 從而確定最佳接種濃度 各級病株數(shù) 發(fā)病級代表值 調(diào)查總株數(shù) 最高級發(fā)病代表值 病情指數(shù) 100 圖 1 大白菜細菌性角斑病田間癥狀 彩色圖版見 中國蔬菜 網(wǎng)站 veg org 1 2 4 病情分級與發(fā)病情況調(diào)查 采用 Image J 軟 件測量發(fā)病的葉片面積和病斑面積 以病斑面積與 葉片面積的比率劃分病情等級 0 級 不發(fā)病 1 級 病斑面積 20 3 級 20 病斑面積 40 5 級 40 病斑面積 60 7 級 60 病斑面積 80 9級 病斑面積 80 群體分級標準參照 九五 國家攻關(guān)組制定 的病毒病和霜霉病的群體分級標準 免疫 I 病 情指數(shù)為 0 高抗 HR 0 病情指數(shù) 11 11 抗病 R 11 11 病情指數(shù) 33 33 耐病 T 33 33 病情指數(shù) 55 55 感病 S 55 55 病 情指數(shù) 77 77 高感 HS 77 77 病情指數(shù) 100 00 發(fā)病率 發(fā)病株數(shù) 總株數(shù) 100 1 3 數(shù)據(jù)處理 將病情指數(shù)進行平方根轉(zhuǎn)換后 采用 DPS 9 50 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)進行方差分析和差異多重比較分析 2 結(jié)果與分析 2 1 大白菜細菌性角斑病病原菌分離 鑒定 取田間發(fā)病株 圖 1 進行病原菌分離 純 化 獲得 ALP 1 菌株 該菌株在 KB 固體培養(yǎng)基 的表面上菌落顯現(xiàn)為乳白色 扁平 近圓形或略呈 不規(guī)則形 單菌落的直徑為 5 7 mm 中央凸起 且具同心環(huán)紋 邊緣呈透明狀 菌體短桿狀 極生 鞭毛 病原菌經(jīng) 16S rDNA gyrB 和 rpoD 基因擴 增 測序 與 NCBI 網(wǎng)站比對后鑒定為丁香假單孢 菌 Pseudomonas syringae pv syringae van Hall 按照 65 中 國 蔬 菜 CHINA VEGETABLES 研究論文 柯赫氏法則 將 ALP 1 菌株接種于大白菜自交系 A224 1 上 發(fā)病癥狀與田間癥狀一致 取接種后 病斑進行病原菌再分離 鑒定 鑒定病原與接種的 菌株 ALP 1 完全一致 確定采自哈爾濱市向陽鄉(xiāng) 東北農(nóng)業(yè)大學實驗實習基地的大白菜細菌性角斑病 病原菌為丁香假單孢菌丁香致病型 Pseudomonas syringae pv syringae van Hall 2 2 接種苗齡 濕度及溫度對大白菜細菌性角斑 病發(fā)病的影響 2 2 1 不同處理的發(fā)病情況 從表 2可以看出 大 白菜細菌性角斑病發(fā)病率和病情指數(shù)最高的均是處 理 3 處理 2次之 參照 九五 國家攻關(guān)組制定 的大白菜病毒病和霜霉病的群體分級標準和其他病 害抗性鑒定等級劃分標準 馬燕勤 等 2018 孫 葉爍 等 2019 處理 2 的病情指數(shù)為 30 06 屬 于抗病等級 而 2018 年自交系 A224 1 田間發(fā)病 重于其他育種材料 同時 7 8葉期大白菜接種 3 d 后開始發(fā)病 明顯早于 3 4葉期和 5 6葉期 綜 合各方面因素考慮 處理 3 苗齡 7 8 葉期 接 種溫度 25 30 接種濕度 90 100 為大白 菜細菌性角斑病發(fā)病的最佳條件組合 種苗齡的極差最小 表明苗期抗性鑒定受接種溫度 的影響最大 接種濕度影響次之 接種苗齡對其影 響最小 且最佳優(yōu)化條件為 A 3 B 3 C 3 2 2 3 病情指數(shù)方差分析 進一步的方差分析結(jié)果 表明 表 3 C因素和 B因素的 F值均大于 F 0 01 6 23 說明這兩個因素各水平間差異達極顯著水 平 二者對細菌性角斑病發(fā)病的影響均較大 A因 素 F值小于 F 0 05 3 93 不同苗齡間差異不顯著 方差分析結(jié)果與極差分析的結(jié)果基本保持一致 表 3 大白菜細菌性角斑病病情指數(shù)方差分析結(jié)果 變異 來源 自由 度 df 偏差平方 和 SS 方差 MS F值 F 0 05 F 0 01 區(qū)組 2 0 38 0 19 0 56 3 93 6 23 A 2 9 75 4 97 3 17 B 2 21 13 8 03 7 35 C 2 59 17 22 36 13 45 誤差 e 18 5 79 0 32 總變異 26 81 39 注 表示差異極顯著 2 3 不同接種濃度對大白菜細菌性角斑病發(fā)病的 影響 確定大白菜細菌性角斑病發(fā)病的最優(yōu)條件組 合后 選取田間有抗感差異的 3 個大白菜自交系 264 1 1 203 1 331 1 進行最佳接種濃度篩選 從表 4 可以看出 當菌液濃度達到 1 10 10 cfu mL 1 時 接種 10 d 后 3 個自交系的病情指數(shù)分別 為 33 21 40 27 57 95 分別表現(xiàn)為抗病 耐病 感病 1 10 8 cfu mL 1 和 1 10 12 cfu mL 1 濃度 菌液接種 10 d 以及 3 個濃度菌液接種 7 d 3 個自 交系之間抗感差異區(qū)分度欠佳 所以最佳接種濃度 為 1 10 10 cfu mL 1 應在接種后 10 d 進行調(diào)查 表 2 試驗設計及極差分析結(jié)果 處理編號 因素 發(fā)病 率 病情 指數(shù) A B C 1 3 4葉期 50 60 15 20 5 00 1 27 2 5 6葉期 70 80 20 25 41 67 30 06 3 7 8葉期 90 100 25 30 61 67 39 24 4 3 4葉期 70 80 25 30 26 67 12 41 5 5 6葉期 90 100 15 20 11 67 2 83 6 7 8葉期 50 60 20 25 15 00 9 95 7 3 4葉期 90 100 20 25 18 33 11 12 8 5 6葉期 50 60 25 30 21 67 12 07 9 7 8葉期 70 80 15 20 13 33 1 55 k1 25 60 21 05 7 06 k2 45 04 44 92 51 31 k3 51 77 53 54 64 04 R 26 17 32 49 59 98 主次順序 C B A 優(yōu)水平 A 3 B 3 C 3 優(yōu)組合 A 3 B 3 C 3 2 2 2 病情指數(shù)極差分析 為了分析接種苗齡 接 種溫度 接種濕度對大白菜細菌性角斑病發(fā)病的影 響程度 對這 3個因素進行極差分析 由表 2可以 看出 接種溫度的極差最大 其次為接種濕度 接 3 結(jié)論與討論 大白菜細菌性角斑病的最適發(fā)病溫度為 25 28 張淑霞 等 2006 本試驗設計了 3個 表 4 不同接種濃度對大白菜細菌性角斑病發(fā)病的影響 接種濃度 cfu mL 1 病情指數(shù) 7 d 10 d 331 1 203 1 264 1 1 331 1 203 1 264 1 1 1 10 8 13 36 R 22 16 R 27 56 R 21 35 R 29 93 R 40 18 T 1 10 10 21 67 R 35 57 T 43 23 T 33 21 R 40 27 T 57 95 S 1 10 12 34 15 T 53 36 T 60 57 S 47 75 T 54 47 T 67 75 S 注 R 抗病 T 耐病 S 感病 66 中 國 蔬 菜 CHINA VEGETABLES 研究論文 接種溫度 15 20 20 25 和 25 30 為 了更接近于自然環(huán)境將晝夜溫差設置為 5 試驗 結(jié)果表明溫度因素對細菌性角斑病發(fā)病影響較大 15 20 不利于發(fā)病 25 30 發(fā)病較重 說明 高溫有利于細菌性角斑病發(fā)病 本試驗接種后發(fā)現(xiàn) 濕度越大發(fā)病越明顯 在接種濕度為 90 100 的條件下最易發(fā)病 這一結(jié)論與張淑霞等 2006 陰雨天易發(fā)病且病菌會借風雨和灌溉水等方式進行 傳播的研究結(jié)果相符 本試驗確定適宜的接種溫度 為 25 30 接種濕度為 90 100 符合細菌 性角斑病田間發(fā)病規(guī)律和發(fā)病基本條件 筆者多年 田間觀察發(fā)現(xiàn)大白菜細菌性角斑病多在 8 月上中 旬 大雨過后空氣潮濕的時候大面積發(fā)生 而且發(fā) 病程度更為嚴重 目前 關(guān)于大白菜細菌性角斑病接種的最適苗 齡未見報道 據(jù)田間發(fā)病調(diào)查統(tǒng)計結(jié)果 大白菜進 入蓮座期且遇陰雨天氣時易發(fā)病 而且多在大白菜 外葉發(fā)生 嚴重時病斑會相互連片 本試驗結(jié)果表 明 接種苗齡對發(fā)病的影響與接種溫度和接種濕度 相比屬于次要因素 但是不同接種苗齡仍然對大白 菜細菌性角斑病發(fā)病產(chǎn)生影響 7 8 葉期接種更 容易發(fā)病 說明大白菜細菌性角斑病在大苗齡植株 上更易發(fā)病 這也與田間觀察結(jié)果相符 盡管到目前為止 還未見大白菜細菌性角斑病 抗性鑒定方法方面的報道 但是接種濃度對蔬菜作 物抗病性鑒定結(jié)果的影響應該是很大的 濃度過低 植株不易發(fā)病 而濃度過高會導致耐病品種和抗病 品種發(fā)病程度偏重 不易于區(qū)分不同品種間的抗性 差異 本試驗結(jié)果表明 接種濃度對大白菜細菌性 角斑病發(fā)病的影響較大 菌液濃度為 1 10 10 cfu mL 1 時 接種 10 d 后可以區(qū)分不同品種間的抗 感病差異 因此確定該濃度為大白菜苗期活體接種 的最佳濃度 本試驗僅是對大白菜細菌性角斑病抗性鑒定方 法的初次探討 希望能對我國大白菜抗細菌性角斑 病育種提供借鑒 參考文獻 關(guān)鐘燕 1990 黃瓜細菌性角斑病苗期抗病性鑒定技術(shù)研究 北方 園藝 Z2 1 2 馬柏壯 李瑩 張艷菊 秦智偉 周秀艷 2013 我國現(xiàn)行推廣黃 瓜品種及種質(zhì)資源對細菌性角斑病的抗性評價 中國蔬菜 18 72 80 馬燕勤 李勤菲 司軍 宋洪元 任雪松 2018 甘藍抗軟腐病離 體鑒定方法探究 植物保護 44 6 136 140 孫葉爍 郝玲玉 張杰 張魯剛 2019 大白菜菌核病抗性鑒定 方法研究 西北農(nóng)林科技大學學報 自然科學版 47 12 123 129 張吉光 陳璐 張管曲 胡小平 王保通 2010 黃瓜細菌性角斑 病菌的分離與鑒定 西北農(nóng)業(yè)學報 19 12 183 187 張淑霞 李浙青 楊曉云 張清霞 2006 大白菜細菌性角斑病的 發(fā)生與防治 上海蔬菜 3 65 Bull C T Goldman P Koike S T 2004 Bacterial blight on arugula a new disease caused by Pseudomonas syringae pv alisalensis in California Plant Disease 88 12 1384 1387 Bull C T Ortiz Lytle M C Ibarra A G du Toit L J Reynolds G 2015 First report of bacterial blight of crucifers caused by Pseudomonas cannabina pv alisalensis in Minnesota on arugula Eruca vesicaria subsp sativa Plant Disease 99 3 415 416 Harighi B 2007 Angular leaf spot of cucumber caused by Pseudomonas syringae pv lachrymans in Kurdistan Plant Disease https doi org 10 1094 PDIS 91 6 0769A Nay M M Souza T L P O Raatz B Mukankusi C M Gon alves Vidigal M C Abreu A F B Melo L C Pastor Corrales M A 2019 A review of angular leaf spot resistance in Common Bean Crop Science 4 1376 1391 Takikawa Y Takahashi F 2014 Bacterial leaf spot and blight of crucifer plants Brassicaceae caused by Pseudomonas syringae pv maculicola and P cannabina pv alisalensis Journal of General Plant Pathology 80 6 466 474 Yamamoto S Kasas H Arnold D L Jackson R W Vivian A Harayama S 2000 Phylogeny of the genus Pseudomonas intrageneric structure reconstructed from the nucleotide sequences of gyrB and rpoD genes Microbiology 146 2385 2394 Establishment of Identification Method for Resistance to Bacterial Angular Leaf Spot in Chinese Cabbage REN Junhui LIU Yan JI Jingjing CHEN Zhiqiang ZHANG Yaowei College of Horticulture Landscape Architecture Northeast Agricultural University Harbin 150030 Heilongjiang China 67 中 國 蔬 菜 CHINA VEGETABLES 研究論文 Abstract Recently damages brought by bacterial angular leaf spot to Chinese cabbage in north and northeastern China has been aggravated year by year Breeding cultivars resistant to angular leaf spot has become an important research direction for breeding of Chinese cabbage But until now a complete identification method for Chinese cabbage resistance to angular leaf spot has not yet been established This experiment carried out isolation and identification on pathogen of bacterial angular leaf spot in Chinese cabbage planted at the experiment and practice base of Northeast Agricultural University and confirmed this pathogen was Pseudomonas syringae pv syringae van Hall Taking this isolate as inoculating pathogen and Chinese cabbage inbred line A224 1 as test material this experiment adopted orthogonal experiment design of L 9 3 4 analyzed the effects of inoculation temperature inoculation humidity and seedling age on occurrence of bacterial angular leaf spot The experiment also took inbred line 264 1 1 203 1 and 331 1 as test material to screen out appropriate inoculating concentration The results showed that the optimal condition combination for occurrence of bacterial angular leaf spot in Chinese cabbage was 25 30 inoculation temperature 90 100 inoculation humidity 7 8 leaf stage seedling age and optimal inoculation concentration was 1 10 10 cfu mL 1 Keywords Chinese cabbage bacterial angular leaf spot resistance identification 宜賓芽菜是四川省宜賓市別具特色的腌制名菜 始創(chuàng)于清道光年間 宜賓舊稱敘州 故古稱 敘府芽菜 宜賓 芽菜與涪陵榨菜 南充冬菜 內(nèi)江大頭菜被譽為四川四大名菜 宜賓芽菜除本省銷售外還遠銷我國昆明 港澳地區(qū)及 東南亞各國 1982 年被評為四川省優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品 1985 年被評為全國優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品 近年來 經(jīng)過精加工的宜賓 碎米芽菜 以其質(zhì)量上乘 方便價廉而深受群眾喜愛 宜賓芽菜為地理標志保護產(chǎn)品 獲有地理標志證明商標 其地域范圍為東經(jīng) 130 36 105 20 北緯 27 50 29 16 含宜賓市行政區(qū)劃范圍內(nèi)的 10 個區(qū) 縣所轄地域 宜賓芽菜在長期發(fā)展過程中形成了一套獨特的加工工藝 據(jù)資料記載 在清光緒年間 敘州近郊的農(nóng)戶在冬末春 初 選用當?shù)亟娌?二平樁 的嫩莖劃成筷子粗細的絲曬成半干 以每 100 kg 鮮菜可得干菜 10 13 kg 為準 將曬好 的菜置桶內(nèi)分層撒鹽拌勻 另熬糖液至挑起成絲的程度 與菜混勻 并加香料 裝壇 腌制時間在 1年以上 現(xiàn)在在 傳統(tǒng)工藝基礎上結(jié)合現(xiàn)代食品科技和管理 做出的芽菜更加味香爽口 營養(yǎng)豐富 宜賓芽菜加工原料 二平樁 為四川宜賓地方特有品種 屬于小葉芥類 成熟后的嫩莖柔嫩而富有彈力 為制作 宜賓芽菜的最佳原料 其次 宜賓市屬于中亞熱帶濕潤季風氣候 常年溫和濕潤 空氣和土壤環(huán)境中含有豐富的適宜 腌制發(fā)酵的微生物 這些大量的有益微生物在芽菜腌制發(fā)酵過程中產(chǎn)生了宜賓芽菜獨特的風味 這與宜賓市另外一個 享負盛名的特產(chǎn) 五糧液 兩者之間有著異曲同工之妙 宜賓芽菜在長期的發(fā)展過程中 在產(chǎn)地自然環(huán)境和人文因素的共同影響下 逐漸形成了獨特的風味 并得以代代 相傳 成為四川省家喻戶曉的傳統(tǒng)醬腌菜 宜賓芽菜含有氨基酸 蛋白質(zhì) 維生素 脂肪等多種營養(yǎng)成分 具有 香 甜 脆 嫩 鮮 等特點 食用廣泛 葷素咸宜 冷熱皆可 是蒸 炒 湯菜和面食的好佐料 宜賓芽菜能與各類糧食 禽蛋 蔬菜制成多種精美的傳統(tǒng)面點 菜肴 鮮香可口 回味綿長 在川菜中獨領(lǐng)風騷 張德純 中國農(nóng)業(yè)科學院蔬菜花卉研究所 北京 100081 宜賓芽菜 中國地理標志產(chǎn)品 68 中 國 蔬 菜 CHINA VEGETABLES 研究論文