ICS 65 020 20 B 05 DB33 浙江省地方標準 DB33 T 2272 2020 杭白菊脫毒種苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程 Technical regulations for virus free plantlets of Chrysanthemum morifolium 2020 08 26發(fā)布 2020 09 26實施 浙江省市場監(jiān)督管理局 發(fā)布 DB33 T 2272 2020 1 前 言 本標準依據(jù) GB T 1 1 2009 給出的規(guī)則起草 請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利 本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別這些專利的責任 本標準由浙江省農(nóng)業(yè) 農(nóng)村 廳提出 本標準由浙江省種植業(yè)標準化技術(shù)委員會歸口 本標準起草單位 浙江大學 浙江省農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心 浙江省中藥材產(chǎn)業(yè)協(xié)會 嘉興市農(nóng)業(yè)科學 研究院桐鄉(xiāng)農(nóng)業(yè)科學研究所 本標準主要起草 人 毛碧增 顏克如 何伯偉 馬常念 謝禮 張亞惠 馮明慧 陸中華 繆悅嘯 朱衛(wèi)東 周建松 戴德江 沈子堯 劉輝輝 楊傳寶 何家浩 DB33 T 2272 2020 2 杭白菊脫毒種苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程 1 范圍 本標準規(guī)定了 杭白菊 脫毒苗的定義 生產(chǎn)技術(shù) 分級 與 質(zhì)量要求 檢測方法和包裝 標志 運輸與 貯存 本標準適用于不攜帶 菊花 B 病毒 Chrysanthemum virus B CVB 番茄不孕病毒 Tomato aspermy virus TAV 煙草花葉病毒 Tobacco mosaic virus TMV 黃 瓜花葉病毒 Cucumber mosaic virus CMV 和馬鈴薯 Y病毒 Potato virus Y PVY 等的脫 毒組培瓶苗 脫毒原種苗及脫毒生產(chǎn)用苗 2 規(guī)范性引用文件 下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的 凡是注日期的引用文件 僅所注日期的版本適用于本文 件 凡是不注日期的引用文件 其最新版本 包括所有的修改單 適用于本文件 GB T 191 包裝儲運圖示標志 GB T 18862 地理標志產(chǎn)品 杭白菊 NY T 401 脫毒馬鈴薯種薯 苗 病毒檢測技術(shù)規(guī)程 NY 525 有機肥料 SN T 2122 2015 進出境植物及植物產(chǎn)品檢疫抽樣方法 3 術(shù)語和定義 下列術(shù)語和定義適用于本 文件 3 1 杭白菊 系 菊科植物菊 Chrysanthemum morifolium Ramat 產(chǎn)于浙江省的藥用栽培杭菊 以 干燥頭狀花序入 藥 3 2 脫毒苗 經(jīng)植物脫病毒方法獲得或引進 經(jīng)檢測后確認不攜帶本標準規(guī)定檢測病毒的種苗 3 2 脫毒組培瓶苗 通過植物脫病毒方法獲得的不攜帶本標準規(guī)定檢測病毒的組織培養(yǎng)瓶苗 3 3 DB33 T 2272 2020 3 脫毒原種苗 脫毒組培瓶苗移栽于無 病原 蟲源的種苗圃內(nèi)存活的植株 3 4 脫毒生產(chǎn)用苗 由脫毒原種 苗定植于無 病原 蟲源的種苗圃內(nèi) 通過扦插或壓條 繁殖的植株 3 5 脫毒率 不攜帶本標準規(guī)定檢測病毒的植株數(shù)占所檢測植株總數(shù)的百分比 4 生產(chǎn)技術(shù) 4 1 脫毒組培瓶苗 4 1 1 外植體選擇 選擇品種特性純正 品質(zhì)優(yōu)良 豐產(chǎn)性能好 無病蟲害的植株 采樣最佳時間為 10月 11月晴天的 10 00 16 00 切取帶生長點的 2 cm 3 cm莖段 4 1 2 無菌苗繁育 莖段經(jīng)無菌水清洗后置于超凈工作臺 切取帶生長點的莖段 1 cm 2 cm 用 70 75 的乙醇沖洗表 面 1 min后 經(jīng)次氯酸鹽和 Tween 20消毒 8 min 10 min 并不斷搖 動 最后用無菌水沖洗 5次 8次 用 無菌濾紙吸干水分 剝?nèi)?0 3 mm 0 5 mm的莖尖分生組織 接種于 生長 培養(yǎng)基中 4 1 3 脫毒苗培育 無菌植株 培養(yǎng)至 1 5 cm 2 0 cm時 置于解剖鏡下挑取 0 3 mm 0 5 mm的莖尖分生組織 接種于 莖 尖 培養(yǎng)基中 植株長到 3 cm 6 cm時接種于生根培養(yǎng)基 4 1 4 脫毒苗快繁 經(jīng)病毒檢測合格的試管苗 植株長 至 6 cm 8 cm時 切取含有 1個 2個節(jié)間的莖段進行擴繁 接種 到 增殖 培養(yǎng)基中 每 20 d 30 d繼代 1次 繼代控制在 4代 6代 4 1 5 培養(yǎng)條件 光照強度 30 mol m 2 s 1 60 mol m 2 s 1 白天溫度 25 2 晚上溫度 18 2 黑暗培養(yǎng) 每天照光 12 h 14 h 4 2 脫毒原種苗和脫毒 生產(chǎn)用 苗 4 2 1 脫毒原種苗生產(chǎn) 4 2 1 1 基質(zhì)準備 建議基質(zhì)栽培 基質(zhì)配比為泥炭 珍珠巖 蛭石 3 1 1 體積比 DB33 T 2272 2020 4 4 2 1 2 定植方式 打開脫毒瓶苗的瓶蓋 置于太陽光非直射處 常溫馴化 1 d 2 d后洗凈瓊脂 種植于苗床 營養(yǎng) 缽或穴盤中 栽后澆透水 第 1周用遮光率為 50 的遮陽網(wǎng)遮蔭 并保持相對濕度 75 90 宜使用防 蟲網(wǎng)隔離 4 2 2 脫毒 生產(chǎn)用苗 繁殖 4 2 2 1 苗床準備 定植前施足基肥 每 667 m2 畝 施入 有機肥 200 kg 300 kg 有機肥應(yīng)符合 NY 525標準 高濃 度 三元復(fù)合肥 15 kg 按畦寬 1 2 m 1 5 m 溝寬 30 cm 35 cm 溝 深 25 cm 35 cm 整地作畦 4 2 2 2 繁殖 方式 4 2 2 2 1 生產(chǎn)用苗的繁殖可以采用扦插繁殖或壓條繁殖 4 2 2 2 2 扦插繁殖 脫毒原種苗株高 30 cm以上時 用消毒刀具剪取帶有 3個 5個節(jié)的 8 cm 10 cm 莖段 莖段基部扦插于苗床 營養(yǎng)缽或穴盤 栽后澆透水 用遮光率為 50 的遮陽網(wǎng)遮蔭 相對 濕度 保 持 75 90 等莖段基部發(fā)出根 掀開遮陽網(wǎng) 4 2 2 2 3 壓條繁殖 苗床上的脫毒原種苗株高 40 cm 50 cm時 用土塊進行 壓條 將枝條平放于 畦面 每隔 20 cm 25 cm用土塊壓住枝條 節(jié)間萌發(fā)不定根和不定芽 4 2 2 2 4 脫毒種苗繁育脫毒生產(chǎn)用苗 繁殖年限控制在 3年 4年 5 分級 與質(zhì)量要求 5 1 脫毒苗按繁育過程可分為脫毒組培瓶苗 脫毒原種苗和脫毒生產(chǎn)用苗 三 類 5 2 脫毒組培瓶苗按質(zhì)量要求分為優(yōu)質(zhì)苗和合格苗 5 3 脫毒組培瓶苗 脫毒種苗的質(zhì)量等級指標 檢驗方法 檢驗規(guī)則 參 見附錄 A 6 抽樣與檢測方法 6 1 抽樣 脫毒組培瓶苗抽樣按 NY T 401 規(guī)定執(zhí)行 脫毒原種苗和脫毒生產(chǎn)用苗的抽樣按 SN T 2122 2015 中 的 5 2執(zhí)行 6 2 檢測方法 病毒檢測方法 參 見附錄 B 7 包裝 標志 運輸與貯存 7 1 包裝 組培瓶苗和脫毒種苗宜用塑料箱或紙板箱包裝 7 2 標志 DB33 T 2272 2020 5 包裝箱內(nèi)附脫毒苗出廠 圃 合格證 病毒檢測報告 參 見附錄 C 外面應(yīng)注明標準號 生產(chǎn)單位的 地址和聯(lián)系電話 其他按 GB T 191的規(guī)定執(zhí)行 7 3 運輸 運輸過程中 應(yīng)控 溫 控 濕 溫度以 15 25 為宜 相對 濕度以 60 90 為宜 7 4 貯存 組培瓶苗常溫弱光照條件下可以貯存 7 d 10 d 脫毒種苗出圃后 3 d內(nèi)定植 8 標準化 生產(chǎn)模式圖 杭白菊 標準化 生產(chǎn)模式圖參見附錄 D DB33 T 2272 2020 6 A A 附 錄 A 資料性附錄 脫毒組培瓶苗 脫毒種苗的質(zhì)量要求 檢驗方法 檢驗規(guī)則 A 1 質(zhì)量要求 A 1 1 脫毒組培瓶苗 質(zhì)量等級指標 脫毒組培瓶苗 質(zhì)量等級指標見表 A 1 表 A 1脫毒組培瓶苗質(zhì)量等級指標 項 目 指 標 優(yōu)質(zhì)苗 合格苗 株高 cm 6 0 10 0 4 0 6 0 莖粗 mm 3 0 1 0 3 0 脫毒率 100 100 外觀要求 生長健壯 根系發(fā)達 無污染 無病斑 A 1 2 脫毒種苗質(zhì)量等級指標 脫毒種苗質(zhì)量等級指標見表 A 2 表 A 2 脫毒種苗質(zhì)量等級指標 項 目 指 標 脫毒原種苗 脫毒生產(chǎn)用苗 脫毒率 100 95 外觀要求 種苗生長健壯 根系發(fā)達 無外源病害 莖粗 3 mm A 2 檢驗方法 株高用分度值 1 mm的直尺測量 莖粗用游標卡尺測量 A 3 檢驗規(guī)則 A 3 1 組批規(guī)則 同一時間 同一地點 取得同一品種不同單株的外植體經(jīng)過組織培養(yǎng)培育 的脫毒苗為同一檢驗批次 A 3 2 檢驗分類 A 3 2 1 出廠 圃 檢驗 DB33 T 2272 2020 7 由廠家執(zhí)行檢驗組培瓶苗和脫毒種苗的株高 和 莖粗 并附有菊花脫毒苗出廠 圃 合格證 A 3 2 2 型式檢驗 型式檢驗是對本標準所規(guī)定的全部要求進行檢驗 在正常生產(chǎn)時 每年進行一次 新建廠家和改變 工藝程序時也應(yīng)進行型式檢驗 A 4 判定原則 檢驗結(jié)果全部符合本標準的 則判定該批次為合格種苗或優(yōu)質(zhì)苗 否則 則判定該批次種苗為不合 格 DB33 T 2272 2020 8 B B 附 錄 B 資料性附錄 杭白菊脫毒種苗規(guī)定檢測的病毒種類和檢測方法 B 1 檢測病毒種類 菊花 B 病毒 Chrysanthemum virus B CVB 番茄不孕病毒 Tomato aspermy virus TAV 煙草花葉病毒 Tobacco mosaic virus TMV 黃瓜花葉病毒 Cucumber mosaic virus CMV 和馬 鈴薯 Y 病毒 Potato virus Y PVY B 2 病毒檢測方法 采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附 DAS ELISA 聚合酶鏈反應(yīng) PCR 和電鏡觀察等方法檢測 在生產(chǎn)上 只需采用其中一種 仲裁時采用聚合酶鏈反應(yīng) PCR 檢測法 B 2 1 雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附 DAS ELISA 檢測法 檢測方法按 NY T 401 2000中附錄 A的方法執(zhí)行 B 2 2 聚合酶鏈 反應(yīng) PCR 檢測法 B 2 2 1 菊花 B病毒 菊花 B病毒 是 單分體線形正義 ssRNA病毒 取各編號 植株 的葉片 提取總 RNA 利用寡聚胸腺嘧啶 T 引物 oligo dT 將 RNA 反 轉(zhuǎn) 錄 為 cDNA 用菊花 B 病 毒 的 特 異 引 物 上 游 引 物 5 ACCGAATTCTTAGTCACAATGCCTCCC 3 和下游引物 5 TCCGAGCTCATAGAGACGGCATACCTT 3 進行聚合酶 鏈反應(yīng) Polymerase chain reaction PCR PCR反應(yīng)條件如下 94 預(yù)變性 5 min后進入循環(huán) 94 變性 30 s 52 退火 30 s 72 延伸 1 min 35個循環(huán) 最后 72 延伸 10 min 擴增得到 650 bp的片 段 擴增產(chǎn)物經(jīng)回收純化后 用 T4 DNA連接酶與 pGEM T載體連接 連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞 獲得 重組 質(zhì)粒 陽性重組質(zhì)粒測序 序 列與 CVB一致的為陽性 B 2 2 2 番茄不孕病毒 番茄不孕病毒是三分體線形正義 ssRNA 病毒 取各編號 植株 的葉片 提取 總 RNA 利用寡聚胸腺嘧 啶 T 引物 oligo dT 將 RNA 反轉(zhuǎn)錄為 cDNA 用 番茄不孕病毒 的特異 引物 上游引物 5 CCATCCCTTCAACATCCGAC 3 和下游引物 5 GTTGAAGCGGAAGGAATACG 3 行 PCR 反應(yīng) PCR 反應(yīng)條件 如下 94 預(yù)變性 5 min 后進入循環(huán) 94 變性 30 s 52 退火 30 s 72 延伸 1 min 35 個循 環(huán) 最后 72 延伸 10 min 擴增得到 494 bp 的片段 擴增產(chǎn)物經(jīng)回收純化后 用 T4 DNA連接酶與 pGEM T 載體連接 連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化感 受態(tài)細胞 獲得重組質(zhì)粒 陽性重組質(zhì)粒測序 序列與 TAV一致的為陽性 B 2 2 3 煙草花葉病毒 煙草花葉病毒是單分體線形正義 ssRNA 病毒 取各編號 植株 的葉片 提取總 RNA 利用寡聚胸腺嘧 啶 T 引物 oligo dT 將 RNA 反轉(zhuǎn)錄為 cDNA 用 煙草花葉病毒 的特異引物 上游引物 5 ACTCCATCTCAGTTCGTGTTCTTG 3 和下游引物 5 GAGCTCTCGAAAGAGCTCCGATTA 3 進行 PCR 反應(yīng) DB33 T 2272 2020 9 PCR 反應(yīng)條件如下 94 預(yù)變性 5 min 后進入循環(huán) 94 變性 40 s 50 退火 35 s 72 延伸 40 s 30 個循環(huán) 最后 72 延伸 10 min 擴增得到 425 bp 的片段 擴增產(chǎn)物經(jīng)回收純化后 用 T4 DNA連接 酶與 pGEM T 載體連接 連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞 獲得重組質(zhì)粒 陽性重組質(zhì)粒測序 序列與 TAV 一 致的為陽性 B 2 2 4 黃瓜花葉病毒 黃瓜花葉病毒是三分 體 線形正義 ssRNA 病毒 取各編號 植株 的葉片 提取總 RNA 利用寡聚胸腺嘧 啶 T 引物 oligo dT 將 RNA 反轉(zhuǎn)錄為 cDNA 用 黃瓜花葉病毒 的特異引物 上游引物 5 GCCACCAAAAATAGACCG 3 和下游引物 5 ATCTGCTGGCGTGGATTTCT 3 進行 PCR反應(yīng) PCR 反應(yīng)條 件如下 94 預(yù)變性 5 min 94 45 s 54 1 min 72 45 s 35 個循環(huán) 最后 72 延伸 10 min 擴增得到 593 bp的片段 擴增產(chǎn)物經(jīng)回收純化后 用 T4 DNA 連接酶與 pGEM T載體連接 連接產(chǎn) 物轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞 獲得重組質(zhì)粒 陽性重組質(zhì)粒測序 序列與 CMV 一致的為陽性 B 2 2 5 馬鈴薯 Y 病毒 馬鈴薯 Y 病毒是單分體線形正義 ssRNA 病毒 取各編號 植株 的葉片 提取總 RNA 利用寡聚胸腺嘧 啶 T 引物 oligo dT 將 RNA 反轉(zhuǎn) 錄為 cDNA 用 馬鈴 薯 Y 病毒 的特 異 引物 上 游引 物 5 ACGTCCAAAATGAGAATGCC 3 和下游引物 5 TGG TGTTCGTGATGTGACCT 3 進行 PCR 反應(yīng) PCR 反 應(yīng)條件如下 94 預(yù)變性 5 min后進入循環(huán) 94 變性 45 s 57 退火 45 s 72 延伸 30 s 35 個循環(huán) 最后 72 延伸 10 min 擴增得到 480 bp的片段 擴增產(chǎn)物經(jīng)回收純化后 用 T4 DNA連接酶 與 pGEM T 載體連接 連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞 獲得重組質(zhì)粒 陽性重組質(zhì)粒測序 序列與 PVY 一致 的為陽性 B 3 電鏡檢測法 B 3 1 檢測程序 電鏡檢測法主要用于檢測菊花 B 病毒 番茄不孕病毒 煙草花葉病毒 黃瓜花葉病毒 和 馬鈴薯 Y 病毒 病葉浸蘸負染色法 用研缽將病葉組織充分研磨 組織汁液經(jīng) 1 的磷鎢酸 pH值 6 8 負染色 在 透射電鏡下觀察病毒顆粒 病葉組織超薄切片法觀察 將病葉片切成 1 mm2 2 mm2小塊 用 2 5 戊二醛及 2 四氧化鋨固定 乙 醇系列脫水 Epon 812環(huán)氧樹脂包埋 超薄切片 以 2 醋酸雙氧鈾及檸檬酸鉛雙重染色 在 透 射電鏡下 觀察細胞內(nèi)病毒顆粒及細胞病理變化 B 3 2 病毒顆粒特 征 B 3 2 1 菊 花 B 病毒 屬于乙型線狀病毒科 Betaflexiviridae 麝香石竹潛隱病毒屬 Carlavirus 病毒顆粒線狀 略彎 曲的 直徑為 12 nm 15 nm 長度為 610 nm 700 nm 通常分散分布在寄主組織的細胞質(zhì)中 或以膜包 裹的束狀或帶狀聚集體形式存在 B 3 2 2 番茄不孕病毒 DB33 T 2272 2020 10 屬 于 雀麥花葉病毒科 Bromoviridae 黃瓜花葉病毒屬 Cucumovirus 病毒顆粒為等軸對稱的 二 十面體 直徑約 29 nm 負染可見一個直徑約 12 nm的電子致密中心 呈 中心孔 樣結(jié)構(gòu) 主要分散在 細胞質(zhì)和液 泡中 B 3 2 3 煙草花葉病毒 屬于植物桿狀病毒科 Virgaviridae 煙草花葉病毒屬 Tobamovirus 病毒顆粒呈剛直的長桿 狀 直徑約為 18 nm 長度為 300 nm 310 nm 主要分布在感病植株細胞質(zhì)及液泡中 B 3 2 4 黃瓜花葉病毒 屬于雀麥花葉病毒科 Bromoviridae 黃瓜花葉病毒屬 Cucumovirus 病毒顆粒為等軸對稱的 二十面體 直徑約 29 nm 負染可見一個直徑約 12 nm的電子致密中心 呈 中心孔 樣結(jié)構(gòu) 主要分散在 感病植株的細胞質(zhì)和液泡中 B 3 2 5 馬鈴薯 Y病毒 屬 于 馬鈴薯 Y病毒科 Potyviridae 馬鈴薯 Y病毒屬 Potyvirus 為彎曲線狀病毒顆粒 直徑 11 nm 13 nm 長度為 680 nm 900 nm 分布在感病植株的細胞質(zhì)內(nèi) 產(chǎn)生細胞質(zhì)柱狀內(nèi)含體 DB33 T 2272 2020 11 C C 附 錄 C 資料性附錄 杭白菊脫毒苗出廠 圃 合格證 杭白菊脫毒苗病毒檢驗報告 C 1 杭白菊 脫毒苗出廠 圃 合格證 菊花脫毒苗出廠 圃 合格證樣式見表 C 1 表 C 1 菊花脫毒苗出廠 圃 合格證 編號 品種名稱 等級 原種采集地 病毒檢測單位 繁殖代數(shù) 種苗數(shù)量 購苗單位 質(zhì)檢員 生產(chǎn)單位 出廠 圃 日期 C 2 杭白菊 脫毒苗病毒檢測報告 菊花 脫毒苗病毒檢測報告樣式見表 C 2 表 C 2 杭白菊 脫毒苗病毒檢驗報告 送樣單位 品種名稱 原種采集地 送樣時間 原種數(shù)量 編 號 編 號 菊花 B 病毒 CVB 番茄不孕病毒 TAV 煙草花葉病毒 TMV 黃瓜 花葉病毒 CMV 馬鈴薯 Y 病毒 PVY D E F G H I J K L M N OP Q R S T U V W X YZ AA BB CCDD EE FF GGHH II JJ DB33 T 2272 2020 12 附 錄 D 資料性附錄 杭白菊脫毒種苗 標準化 生產(chǎn)模式圖 杭白菊脫毒種苗 標準化 生產(chǎn)模式圖見圖 D 1 圖 D 1 杭白菊脫毒種苗生產(chǎn)模式圖 脫毒組培瓶苗 脫毒原種苗 脫毒 生產(chǎn)用苗 外植體 采樣 無菌苗繁育 脫毒苗培育 脫毒苗快繁 選擇品種特性純 正 品質(zhì)優(yōu)良 豐產(chǎn)性能好 無 病蟲害的植株 采樣最佳時間為 10月 11月晴天 的 10 00 16 00 切取帶生 長點的 2 cm 3 cm莖 段 莖段經(jīng)無菌水清洗后置于 超凈工作臺 切取帶生長 點的莖段 1 cm 2 cm 用 70 75 的乙醇沖洗表面 1 min后 經(jīng)次氯酸鹽和 Tween 20消毒 8 min 10 min 并不斷搖動 最后用 無菌水沖洗 5次 8次 用 無菌濾紙吸干水分 剝?nèi)?0 3 mm 0 5 mm的莖尖分 生組織 接種于生長培養(yǎng) 基中 無菌植株培養(yǎng) 至 1 5 cm 2 0 cm時 置于解剖 鏡下挑取 0 3 mm 0 5 mm的莖 尖分生組織 接 種于莖尖培養(yǎng) 基中 植株長到 3 cm 6 cm時接 種于生根培養(yǎng) 基 經(jīng)病毒檢測合格的 試 管苗 植株長至 6 cm 8 cm時 切取 含有 1個 2個節(jié)間 的莖段進行擴繁 接種到增殖培養(yǎng)基 中 每 20 d 30 d 繼代 1次 繼代控制 在 4代 6代 基質(zhì)準備 建議基質(zhì)栽培 基質(zhì)配比為泥炭 珍珠巖 蛭石 3 1 1 體積比 定植方式 打開脫毒瓶苗 的瓶蓋 置于太陽光非直 射處 常溫馴化 1 d 2 d 后洗凈瓊脂 種植于苗床 營養(yǎng)缽或穴盤中 栽后澆 透水 第 1周用遮光率為 50 的遮陽網(wǎng)遮蔭 并保持 相對濕度 75 90 宜使 用防蟲網(wǎng)隔離 苗床準備 定植前施足基肥 每 667 m2 畝 施入 有機肥 2 00 kg 3 00 kg 有機肥應(yīng)符合 NY 525 標 準 高濃度三元復(fù)合肥 15 kg 按畦寬 1 2 m 1 5 m 溝寬 30 cm 35 cm 溝深 25 cm 35 cm 整地作畦 繁殖方式 生產(chǎn)用苗的繁殖可以采用扦插繁殖或壓條 繁殖 扦插繁殖 脫毒原種苗株高 30 cm 以上時 用消毒刀 具剪取帶有 3 個 5 個節(jié)間的 8 cm 10 cm 莖段 莖 段基部扦插于苗床 營養(yǎng)缽或穴盤 栽后澆透水 用 遮光率為 50 的遮 陽網(wǎng)遮蔭 相對濕度保持 75 90 等莖段基部發(fā)出根 掀開遮陽網(wǎng) 壓條繁殖 苗床上 的脫毒原種苗株高 40 cm 50 cm 時 用土塊進行 壓 條 將枝條平放于畦面 每隔 20 cm 25 cm 用土塊 壓住枝條 節(jié)間萌發(fā)不定根和不定芽 脫毒種苗繁育脫毒生產(chǎn)用苗 繁殖年限控制在 3 年 4 年