doi 10 16473 j cnki xblykx1972 2021 01 020 巴西人參組培快繁體系的建立 蔣華 廣西壯族自治區(qū)國有維都林場雅江分場 廣西 來賓546100 摘要 以巴西人參帶芽莖段為外植體 研究培養(yǎng)基 植物生長調(diào)節(jié)劑 移栽基質(zhì)等對巴西人參組培快繁的影響 結(jié)果表明 最佳的初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基為WPM 6 BA 0 4 mg L NAA 0 4 mg L 初代芽誘導(dǎo)率達(dá)90 65 每個外 植體平均萌芽數(shù)為2 90個 平均芽高2 70 cm 最佳的繼代增殖培養(yǎng)基為WPM 6 BA 2 0 mg L NAA 0 2 mg L 采用平鋪的方式接種 培養(yǎng)25 d增殖系數(shù)可達(dá)5 21 最佳的生根培養(yǎng)基為1 2WPM 6 BA 0 3 mg L NAA 0 5 mg L PP333 200 培養(yǎng)9 85 d即可生根 生根率高達(dá)98 85 株平均生根數(shù)為18 87條 選擇椰糠 谷殼 4 1 v v 作為移栽基質(zhì) 移栽成活率最高 可達(dá)98 67 本研究建立的組培快繁技術(shù)體系可適用于巴西人 參工廠化育苗生產(chǎn) 為巴西人參種苗快速繁殖提供技術(shù)保障 關(guān)鍵詞 巴西人參 培養(yǎng)基 植物生長調(diào)節(jié)劑 組織培養(yǎng) 快速繁殖 中圖分類號 S 723 1 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 1672 8246 2021 01 0138 07 Rapid Propagation System of Pfaffia paniculate Tissue Culture JIANG Hua Guangxi Weidu State Forest Farm Yajiang Branch Laibin Guangxi 546100 P R China Abstract Using stem with buds as explants the effects of culture medium plant growth regulator and transplanting matrix on the tissue culture of Pfaffia paniculate was studied The results showed that the optimal medium for initial induction was WPM 6 BA 0 4 mg L NAA 0 4 mg L the induction rate of initial buds was 90 65 the average number of buds was 2 90 and the average height of buds was 2 70 cm The optimal subculture culture medium was WPM 6 BA 2 0 mg L NAA 0 2 mg L and the proliferation coefficient of 25 d was 5 21 The best rooting medium was 1 2WPM 6 BA 0 3 mg L NAA 0 5 mg L PP333 200 mg L the average time of root formation was 9 85 days the rooting rate of buds was 98 85 and the average number of rooting was 18 87 Coconut bran chaff 4 1 v v was selected as transplanting substrate the transplanting survival rate was the highest up to 98 67 The technology system of tissue culture and rapid propagation established can be applied to the industrial seedling production of P paniculate which provides technical guarantee for rapid propagation of P paniculate seedlings Key words Pfaffia paniculate culture medium plant growth regulator tissue culture rapid propagation 巴西人參 Pfaffia paniculate 又稱琺菲亞 為莧科 Amaranthaceae 無柱莧屬 Pfaffia Mart 多年生草本植物 1 主要分布于南美洲巴 西等國的熱帶雨林地區(qū) 生長在陽光較為充足的地 方 目前已在廣西 四川 浙江等地引種成功 2 其根可入藥 富含多種礦物質(zhì) 氨基酸 維生素和 皂苷成分 有降血糖 抗腫瘤 緩解疲勞 增強(qiáng)免 疫力和治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等功效 3 4 因其療效廣 泛 國內(nèi)外對于巴西人參的產(chǎn)業(yè)化開發(fā)備受關(guān)注 研制的多種藥食兩用的產(chǎn)品已投放市場 5 6 廣受 第50卷 1期 2021年2月 西 部 林 業(yè) 科 學(xué) Journal of West China Forestry Science Vol 50 No 1 Feb 2021 收稿日期 2020 08 10 基金項(xiàng)目 廣西科技計(jì)劃項(xiàng)目 桂科AD18294019 桂科AD18281083 作者簡介 蔣華 1986 男 工程師 主要從事林業(yè)相關(guān)研究 E mail 498773562 qq com 歡迎 經(jīng)濟(jì)效益與市場前景極為廣闊 然而 由于 國際市場的超強(qiáng)度開發(fā) 巴西人參野生資源日益減 少 已很難滿足市場需求 此外 巴西人參結(jié)實(shí)較 少 種子發(fā)芽率極低 嚴(yán)重限制其開發(fā)進(jìn)程 因 此 解決資源緊缺問題已成為巴西人參研究的主要 目標(biāo)和首要任務(wù) 7 藥用植物組織培養(yǎng)與快速繁殖 不僅能夠克服 種子繁殖中存在的諸多問題 還能夠改善常規(guī)繁殖 速度慢 繁殖率低的缺點(diǎn) 且不受季節(jié) 氣候等因 素的影響 具有速度快 質(zhì)量高 便于集約管理的 優(yōu)點(diǎn) 可在較短時間內(nèi)獲得大量遺傳性狀一致的植 株 供大規(guī)模規(guī)范化種植 目前 國內(nèi)外對巴西人 參的研究多集中在化學(xué)及藥理作用方面 有關(guān)巴西 人參種子萌發(fā) 苗木生產(chǎn)和栽培等繁殖培育方面的 報(bào)道相對較少 嚴(yán)重制約了其規(guī)?；a(chǎn) 8 國 內(nèi)外在組織培養(yǎng)育苗方面的研究甚少 僅僅研究了 莖段類型和容器大小 9 N和P濃度 10 蔗 糖 11 CO 12 13 等不同碳源等對巴西人參離體繁育 的影響 多數(shù)直接選用MS作為培養(yǎng)基 未見對組 織培養(yǎng)中各因素系統(tǒng)篩選的報(bào)道 國內(nèi)有關(guān)研究 中 凌征柱等 14 和劉園 15 研究所得配方育苗周期 相對較長 增殖系數(shù)較低 僅為3 22 3 92 許 鴻源等 16 加靈發(fā)素進(jìn)行組培雖然可提高育苗效率 但靈發(fā)素為其實(shí)驗(yàn)室制備得來 并非市售藥品 藥 品難得 成本較高 并不適于大規(guī)模組培工廠化育 苗 因此 本研究以巴西人參莖段作為外植體材 料 通過對初代誘導(dǎo)培養(yǎng) 繼代增殖培養(yǎng) 生根培 養(yǎng)和煉苗移栽等技術(shù)環(huán)節(jié)的影響因素進(jìn)行系統(tǒng)研 究 以期克服現(xiàn)有技術(shù)的不足 建立一套育苗周期 短 成活率高 苗木質(zhì)量好 成本較低的適于工廠 化生產(chǎn)的巴西人參組培快繁技術(shù)體系 為開發(fā)和利 用巴西人參以及豐富我國藥用植物資源種類 緩解 國內(nèi)外市場種苗稀缺的狀況提供技術(shù)支撐 1 材料與方法 1 1 試驗(yàn)材料 以巴西人參帶芽莖段為外植體材料 采自廣西 壯族自治區(qū)國有維都林場雅江分場苗圃 1 2 外植體消毒與初代芽誘導(dǎo) 于3 5月連續(xù)3個晴天的上午 剪取健壯巴 西人參植株帶腋芽莖段 去除葉片 于0 5 洗潔 精溶液中浸泡5 min 用自來水沖洗2 3 h 置于 超凈工作臺上切成1 5 2 5 cm的莖段 于75 酒精中浸泡30 s后轉(zhuǎn)入0 1 氯化汞溶液中浸泡10 min 無菌水沖洗5 6遍 將滅菌處理過的外植體 分別接種在MS WPM B5 N6 Nitsch和White 6種培養(yǎng)基上 附加預(yù)試驗(yàn)篩選的較優(yōu)的植物生長 調(diào)節(jié)劑組合 6 BA 0 4 mg L和NAA 0 4 mg L 進(jìn)行初代芽誘導(dǎo)培養(yǎng) 每個處理20瓶 每瓶接種 1個莖段 重復(fù)3次 培養(yǎng)25 d后統(tǒng)計(jì)初代芽誘導(dǎo) 率 每一莖段平均萌芽個數(shù)及芽高 1 3 繼代增殖培養(yǎng) 選擇生長較好且長勢一致的初代芽 以1 2實(shí) 驗(yàn)篩選的最佳培養(yǎng)基作為基本培養(yǎng)基 分別添加不 同濃度和配比的6 BA 0 1 2 mg L 2 IP 0 1 2 mg L IBA 0 0 2 0 4 mg L 和 NAA 0 0 2 0 4 mg L 進(jìn)行增殖培養(yǎng) 上述 試驗(yàn)采用L9 34 設(shè)計(jì)正交試驗(yàn) 從中選取最優(yōu) 組合 然后以最優(yōu)組合為培養(yǎng)基配方 分別采用直 插 單芽直立插入 和平鋪 單芽剪取節(jié)的位置 水平接種 兩種方式接種 分別培養(yǎng)不同日期后 觀察統(tǒng)計(jì)繼代芽增殖系數(shù) 每個處理10瓶 每瓶 接種3個芽 重復(fù)3次 1 4 生根培養(yǎng) 剪取高度 2 cm的芽苗 以1 2WPM 2 3WPM WPM為基本培養(yǎng)基 附加不同濃度的生長激素6 BA 0 0 3 0 6 mg L NAA 0 1 0 5 1 0 mg L 和多效唑PP333 0 200 400 mg L 進(jìn)行生根培養(yǎng) 上述試驗(yàn)采用L9 34 正交設(shè)計(jì)進(jìn)行試驗(yàn) 每個處理 10瓶 每瓶接種3個芽 重復(fù)3次 統(tǒng)計(jì)生根時間 培養(yǎng)30 d后生根率 生根條數(shù)和根系狀況 1 5 煉苗移栽 將根長約1 cm的組培苗 轉(zhuǎn)移到室外自然光下 煉苗5 d 然后用清水洗凈根部培養(yǎng)基 移栽至經(jīng)過 0 1 高錳酸鉀 KMnO4 消毒過的基質(zhì)中 移栽基 質(zhì)為 1 河沙 2 紅心土 3 椰糠 谷殼 4 1 v v 4 營養(yǎng)土 蛭石 2 1 v v 每種基質(zhì)移栽50株 重復(fù)3次 30 d后統(tǒng)計(jì)成活率 1 6 培養(yǎng)基配制消毒及培養(yǎng)條件 培養(yǎng)基配制消毒 以上各培養(yǎng)基均添加蔗糖 30 g L 瓊脂4 g L pH 5 8 6 2 配制分裝后在 121 下高壓蒸汽滅菌20 min 培養(yǎng)條件 溫度 25 3 光照時間12 14 h d 光照強(qiáng)度1 500 2 500 lx 1 7 數(shù)據(jù)處理 誘導(dǎo)率 萌芽外植體數(shù) 接種外植體 數(shù) 100 931 第1期 蔣華 巴西人參組培快繁體系的建立 增殖系數(shù) 芽生長到可供切割芽數(shù) 接種時單 芽總數(shù) 生根率 生根芽數(shù) 接種總芽數(shù) 100 成活率 成活苗數(shù) 移栽苗數(shù) 100 采用EXCEL 2016對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行常規(guī)統(tǒng)計(jì)和 作圖 SPSS 19 0進(jìn)行方差分析和多重比較 鄧肯 氏新復(fù)極差法 顯著性水平均設(shè)定為 0 05 2 結(jié)果與分析 2 1 初代誘導(dǎo)培養(yǎng) 巴西人參帶芽莖段外植體 圖1A 滅菌處理 后進(jìn)行初代誘導(dǎo)培養(yǎng) 6種不同基本培養(yǎng)基對初代 芽誘導(dǎo)的影響見表1 可以看出 不同培養(yǎng)基對巴 西人參初代誘導(dǎo)效果差異顯著 在誘導(dǎo)率方面 效 果較好的是WPM和MS培養(yǎng)基 初代芽誘導(dǎo)率分 別為90 65 和82 61 兩者間差異不顯著 最 差的是N6培養(yǎng)基 初代芽誘導(dǎo)率僅為13 56 在萌芽數(shù)方面 WPM培養(yǎng)基顯著多于其他5種培 養(yǎng)基 其他5種培養(yǎng)基間差異不明顯 在芽高方 面 效果最好的是WPM培養(yǎng)基 較差的是N6 Nitsh和White培養(yǎng)基 因此 以WPM作為巴西人 參基本培養(yǎng)基進(jìn)行初代誘導(dǎo)培養(yǎng)效果最佳 圖 1B 誘導(dǎo)率達(dá)90 65 平均萌芽數(shù)為2 90個 平均芽高2 70 cm 圖1 巴西人參組織培養(yǎng)與快速繁殖 注 A為滅菌外植體 B為初代誘導(dǎo)培養(yǎng) C為繼代增殖培養(yǎng) D為生根培養(yǎng) E為生根培養(yǎng) F為移栽成活組培苗 Fig 1 The tissue culture and rapid propagation of P paniculate 表1 基本培養(yǎng)基對初代芽誘導(dǎo)的影響 Tab 1 Effect of basic medium on initial bud induction 處理編號基本培養(yǎng)基誘導(dǎo)率 平均萌芽數(shù) 個平均芽高 cm A1 MS 82 61 7 52a 1 70 0 23b 1 23 0 09b A2 WPM 90 65 4 71a 2 90 0 32a 2 70 0 15a A3 B5 47 25 4 58b 1 43 0 24b 1 37 0 12b A4 N6 13 56 2 42c 1 17 0 03b 0 47 0 15c A5 Nitsh 41 64 3 53b 1 13 0 09b 0 40 0 06c A6 White 23 69 5 31c 1 63 0 09b 0 67 0 15c 注 同一列不同字母顯示差異顯著 P 0 05 下同 2 2 繼代增殖培養(yǎng) 2 2 1 植物生長調(diào)節(jié)劑對繼代芽增殖的影響 選擇高約1 5 cm的初代芽 直立插入到9種 不同的繼代增殖培養(yǎng)基上 基本培養(yǎng)基為WPM 培養(yǎng)25 d觀察增殖效果 表2 由表2可知 不 同培養(yǎng)基增殖系數(shù)和芽高差異顯著 其中B7增殖 系數(shù)最高 為4 58 B3芽高最高 為2 97 cm 對 正交試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行極差分析 表3 結(jié)果顯示 在增殖系數(shù)方面 各因素的極差分別為 R6 BA 1 53 R2 IP 0 24 RIBA 0 40 RNAA 0 42 顯示 各因素影響作用的主次順序?yàn)?6 BA NAA IBA 2 IP 增殖系數(shù)最優(yōu)的組合應(yīng)為 6 BA 2 0 mg L 2 IP 0 mg L IBA 0 mg L NAA 0 2 mg L 在芽高方面 各因素的極差分別為R6 BA 0 06 R2 IP 0 65 RIBA 0 50 RNAA 0 50 即因素影響 作用的主次順序?yàn)?2 IP IBA或NAA 6 BA 芽高最優(yōu)的組合應(yīng)為6 BA 2 0 mg L 2 IP 0 mg L IBA 0 4 mg L NAA 0 mg L 綜合分析 繼代增 殖培養(yǎng)基應(yīng)該以增殖系數(shù)為主要參考指標(biāo) 芽高為 次要指標(biāo) 最終優(yōu)選的巴西人參增殖培養(yǎng)的最佳生 長調(diào)節(jié)劑處理為6 BA 2 0 mg L NAA 0 2 mg L 采用此組合進(jìn)行巴西人參繼代增殖培養(yǎng) 增殖系數(shù) 高 苗木生長健壯 圖1C 041西 部 林 業(yè) 科 學(xué) 2021年 表2 植物生長調(diào)節(jié)劑對繼代芽增殖的影響 Tab 2 Effects of plant growth regulators on subculture bud multiplication 處理編號植物生長調(diào)節(jié)劑 mg L 1 6 BA 2 IP IBA NAA增殖系數(shù)平均芽高 cm B1 0 2 0 0 4 2 75 0 38cd 1 63 0 30b B2 0 1 0 2 0 2 2 49 0 15d 1 43 0 09b B3 0 0 0 4 0 2 65 0 09cd 2 97 0 58a B4 1 2 0 2 0 3 40 0 21bc 1 77 0 09b B5 1 1 0 4 0 4 3 58 0 46b 2 10 0 21b B6 1 0 0 0 2 4 25 0 14ab 2 00 0 15b B7 2 2 0 4 0 2 4 58 0 36a 1 83 0 07b B8 2 1 0 0 4 00 0 00ab 2 03 0 39b B9 2 0 0 2 0 4 3 90 0 16ab 2 20 0 15ab 表3 植物生長調(diào)節(jié)劑對繼代芽增殖影響的極差分析 Tab 3 Range analysis of the effect of plant growth regulators on the proliferation of subculture buds 增殖效果指標(biāo)6 BA 2 IP IBA NAA 增殖 系數(shù) K1 2 63 3 58 3 67 3 41 K2 3 74 3 36 3 26 3 78 K3 4 16 3 60 3 60 3 35 R 1 53 0 24 0 40 0 42 平均 芽高 cm K1 2 01 1 74 1 89 1 98 K2 1 96 1 85 1 80 1 75 K3 2 02 2 39 2 30 2 26 R 0 06 0 65 0 50 0 50 2 2 2 接種方式對繼代芽增殖的影響 分別采用單芽直插和單芽平鋪2種接種方式 培養(yǎng)15 30和45 d后觀察繼代芽生長情況 結(jié)果 見圖2 圖2 不同接種方式對繼代芽增殖的影響 Fig 2 Effects of different inoculation mode on the proliferation of subculture buds 由圖2可知 在相同培養(yǎng)時間時 采用平鋪接 種的方式其增殖系數(shù)明顯高于直插接種 采用直插 方式接種 隨著生長時間的延長增殖系數(shù)逐漸升 高 培養(yǎng)35 d增殖系數(shù)最高為5 16 顯著高于采 用直插方式接種的其他培養(yǎng)時間 采用平鋪方式接 種 隨著培養(yǎng)時間的增加 增殖系數(shù)逐漸增加 25 d增殖系數(shù)達(dá)5 21 之后增殖系數(shù)升高不顯著 因 此 綜合考慮增殖系數(shù)和成本 巴西人參適宜繼代 增殖的培養(yǎng)方式為以單芽平鋪的方式接種 選擇 25 d作為繼代周期最佳 2 3 生根培養(yǎng) 采用正交試驗(yàn)研究不同基本培養(yǎng)基及植物生長 調(diào)節(jié)劑配比對巴西人參生根的影響 結(jié)果見表4 不同的培養(yǎng)基和植物生長調(diào)節(jié)劑配比對巴西人參生 根率 生根數(shù)和生根時間的影響差異顯著 通過對 正交試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行極差分析 表5 可知 在生根 率方面 各因素的極差分別為R基本培養(yǎng)基 9 12 R6 BA 38 6 RNAA 21 52 RPP333 2 36 即因素 影響作用的主次順序?yàn)? BA NAA 基本培養(yǎng) 基 PP333 巴西人參生根率最高的培養(yǎng)基組合是 1 2WPM 6 BA 0 3 mg L NAA 0 5 mg L PP333 200 mg L 在根條數(shù)方面 各因素的極差分別為 R基本培養(yǎng)基 1 49 R6 BA 8 63 RNAA 1 96 RPP333 1 81 即因素影響作用的主次順序?yàn)? BA NAA 基本培養(yǎng)基 PP333 巴西人參生根條數(shù)最 多的培養(yǎng)基組合是1 2WPM 6 BA 0 3 mg L NAA 0 1 mg L PP333 200 mg L 在生根時間方面 各 因素的極差分別為R基本培養(yǎng)基 3 66 R6 BA 3 28 RNAA 2 34 RPP333 0 83 即因素影響作用的主次 順序?yàn)榛九囵B(yǎng)基 6 BA NAA PP333 巴西人 參生根時間最短的培養(yǎng)及組合是1 2WPM 6 BA 0 3 mg L NAA 0 5 mg L PP333 200 mg L 其中 用生根率和生根條數(shù)這兩個指標(biāo)優(yōu)選的培養(yǎng)基組合 一致 而這兩個因素也是評價(jià)生根效果最重要的因 素 因此 確定巴西人參生根誘導(dǎo)最佳的培養(yǎng)基組 合為1 2WPM 6 BA 0 3 mg L NAA 0 5 mg L PP333 200 mg L 采用此種培養(yǎng)基生根率高 根條 數(shù)多 根系狀況佳 生根效果見圖1D和圖1E 141 第1期 蔣華 巴西人參組培快繁體系的建立 表4 培養(yǎng)基配比對生根的影響 Tab 4 Effects of medium combinations on rooting 編號基本培養(yǎng)基6 BA mg L 1 NAA mg L 1 PP333 mg L 1生根率 生根數(shù) 條生根時間 d C1 1 2WPM 0 0 1 0 78 19 1 17c 16 69 0 46b 13 96 0 79b C2 1 2WPM 0 3 0 5 200 98 85 1 15a 18 87 1 33a 9 85 0 34d C3 1 2WPM 0 6 1 0 400 38 65 1 57g 7 67 0 45be 13 97 0 19b C4 2 3WPM 0 0 5 400 83 06 1 57b 15 63 0 18c 12 89 0 35bc C5 2 3WPM 0 3 1 0 0 69 26 0 63d 15 22 0 16c 11 55 0 70bd C6 2 3WPM 0 6 0 1 200 46 24 1 24f 10 36 0 05d 16 54 0 28a C7 WPM 0 1 0 200 58 21 0 27e 15 05 0 35c 14 67 0 22b C8 WPM 0 3 0 1 400 81 35 1 43bc 16 76 0 56b 16 68 0 28a C9 WPM 0 6 0 5 0 48 76 2 23f 6 94 0 29e 17 42 1 22a 表5 培養(yǎng)基配比對巴西人參生根影響的極差分析 Tab 5 Range analysis of effects of different medium combinations on rooting of P paniculate 生根 效果指標(biāo) 基本培 養(yǎng)基6 BA NAA PP333 生根率 K1 71 90 73 15 68 59 65 4 K2 66 19 83 15 76 89 67 77 K3 62 77 44 55 55 37 67 69 R 9 12 38 6 21 52 2 36 根條數(shù) 條 K1 14 41 15 79 14 60 12 95 K2 13 74 16 95 13 81 14 76 K3 12 92 8 32 12 65 13 35 R 1 49 8 63 1 96 1 81 生根 時間 d K1 12 59 13 84 15 73 14 31 K2 13 66 12 69 13 39 13 69 K3 16 26 15 98 13 40 14 51 R 3 66 3 28 2 34 0 83 2 4 煉苗移栽 將根系狀況良好的巴西人參組培苗經(jīng)過煉苗 移栽至4種不同基質(zhì)中 移栽30 d后統(tǒng)計(jì)成活率 見圖3 圖3 不同基質(zhì)對移栽成活率的影響 Fig 3 Effect of different substrates on the survival rate of transplanting 由圖3可知 不同基質(zhì)對移栽成活率影響差異 顯著 其中椰糠 谷殼 4 1移栽成活率最高 為98 67 生長狀況良好 圖1F 其次是營養(yǎng) 土 蛭石 2 1 成活率為91 33 但二者差別 不大 最差的是河沙 成活率為68 00 因此 綜合成本和成活率 移栽巴西人參最好選擇椰糠 谷殼 4 1作為移栽基質(zhì) 3 討論與結(jié)論 基本培養(yǎng)基直接關(guān)系植物的生長和發(fā)育 17 不同植物在組織培養(yǎng)的不同階段所需的營養(yǎng)物質(zhì)不 同 培養(yǎng)基作為營養(yǎng)來源 可為植物的生長提供充 足的營養(yǎng) 但不同種類的培養(yǎng)基 營養(yǎng)成分差異較 大 MS培養(yǎng)基是應(yīng)用范圍最廣的 各種元素齊全 的高鹽離子濃度培養(yǎng)基 尤其是NH4 和NO3 的濃 度比較高 但MS也會因其高鹽離子濃度對某些植 物的生長產(chǎn)生一定的抑制作用 18 WPM因其含有 較低濃度的無機(jī)鹽離子 廣泛用于植物組培快繁 白宇清等 19 研究毛錦杜鵑 Rhododendron moumainense 莖段組織培養(yǎng)時發(fā)現(xiàn)WPM是最佳的 基本培養(yǎng)基 效果明顯好于MS培養(yǎng)基 葉雯 等 20 研究火焰南天竹 Nandina domestica Fire power 莖段組織培養(yǎng)優(yōu)化時發(fā)現(xiàn)以WPM作為基 本培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)和增殖效果最佳 1 2WPM作為 基本培養(yǎng)基進(jìn)行生根誘導(dǎo)生根率達(dá)95 倪鐘 等 21 對北京地區(qū)優(yōu)良梅花 Armeniaca mume 進(jìn) 行莖段啟動培養(yǎng)研究時也發(fā)現(xiàn)WPM培養(yǎng)基明顯優(yōu) 于MS培養(yǎng)基 因此 為給植物生長提供適宜的營 養(yǎng)供給 對培養(yǎng)基種類的篩選非常必要 篩選合適 的培養(yǎng)基是植物組培快繁成功的第一步 本研究也 發(fā)現(xiàn)NH4 和NO3 濃度較低的WPM培養(yǎng)基更適合 241西 部 林 業(yè) 科 學(xué) 2021年 巴西人參初代芽誘導(dǎo)和繼代增殖 更低的NH4 和 NO3 濃度的1 2WPM培養(yǎng)基更有助于巴西人參根 的誘導(dǎo)和生長 基本培養(yǎng)基配合適宜的植物生長調(diào)節(jié)劑 才能 更好地誘導(dǎo)細(xì)胞分裂 芽和根的分化等 植物生長 調(diào)節(jié)劑是影響細(xì)胞分裂和組織分化的重要因素 能 夠在極低濃度下調(diào)節(jié)植物的生長發(fā)育 植物種類不 同 細(xì)胞分裂和組織分化所需的植物生長調(diào)節(jié)劑的 種類和濃度不同 22 針對培養(yǎng)材料的種類 來源 和生長期的不同 篩選植物生長調(diào)節(jié)劑的種類和濃 度 既是組培工作的重點(diǎn)也是難點(diǎn) 細(xì)胞分裂素和 生長素是常用的植物生長調(diào)節(jié)劑 23 二者之間的 比例對器官再生途徑起著關(guān)鍵的調(diào)控作用 24 凌 征柱等 14 研究巴西人參組培時繼代培養(yǎng)基選用MS 6 BA 1 2 mg L NAA 0 2 mg L時40 d為一個增 殖周期 增殖系數(shù)最高 為3 92 生根培養(yǎng)基選 用1 2 MS NAA 1 0 mg L時15 d獲得生根植株 劉園 15 研究巴西人參組織培養(yǎng)技術(shù)時提出繼代培 養(yǎng)基選用MS 6 BA 1 2 1 5 mg L NAA 0 2 mg L 時增殖系數(shù)最高 為3 22 3 92 生根培養(yǎng)基選 用1 2MS NAA 1 0 mg L或1 2MS PP333 0 2 mg L時 生根率在90 以上 Flores等 25 研究BA 和TDZ對巴西人參生長的影響時認(rèn)為以莖節(jié)數(shù)量 作為衡量指標(biāo)不添加細(xì)胞分裂素的MS更適合巴西 人參的生長 Nicoloso等 26 采用不添加植物生長調(diào) 節(jié)劑的MS培養(yǎng)基 40 d可發(fā)育成完整植株 移栽 成活率為95 本研究通過正交試驗(yàn)更加簡便高 效地篩選了繼代培養(yǎng)基 WPM 6 BA 2 0 mg L NAA 0 2 mg L 和生根培養(yǎng)基 1 2WPM 6 BA 0 3 mg L NAA 0 5 mg L PP333 200 mg L 25 d 作為繼代周期 增殖系數(shù)可達(dá)5 21以上 平均組 培9 85 d即可生根 生根率高達(dá)98 85 相對來 說更加適合巴西人參組培快繁 接種方式也是影響苗木再生的關(guān)鍵之一 付傳 明等 27 研究發(fā)現(xiàn)采用水平接種的方式可誘導(dǎo)出更 多的根系 劉海龍等 28 研究發(fā)現(xiàn)接種方式是影響 澳洲茶樹 Melaleuca alternifolia 增殖系數(shù)的最主 要因素 將1 cm以上單芽剪碎平鋪在培養(yǎng)基上增 殖效果最佳 本研究采用平鋪方式接種 在相同的 培養(yǎng)基和培養(yǎng)時間內(nèi) 增殖系數(shù)顯著提高 這可能 是因?yàn)樗降慕臃N方式在一定程度上增加了材料與 培養(yǎng)基的接觸面積 更有利于接種材料對營養(yǎng)物質(zhì) 的吸收 16 移栽是植物組織培養(yǎng)的最后一個環(huán)節(jié) 盡管移 栽過程和方法比較簡單 但移栽基質(zhì)的選擇至關(guān)重 要 不經(jīng)篩選盲目地移栽會導(dǎo)致組培苗大量死亡 以致前功盡棄 29 在適宜的環(huán)境條件下 移栽基 質(zhì)的透氣性和含水量對誘發(fā)新根和移栽成活率影響 較大 30 在移栽時選擇不同配比的基質(zhì) 使得基 質(zhì)更加透氣 保肥 保水 可以得到較高的移栽成 活率 31 本研究發(fā)現(xiàn) 河沙作為移栽基質(zhì)相對通 氣透水 但保肥力差 紅心土透氣性相對較差 兩 者移栽成活率低 而采用通氣 透水性和保肥力好 的移栽基質(zhì) 尤其椰糠 谷殼 4 1 巴西人參 的移栽成活率較高 可達(dá)98 67 綜上所述 巴西人參的最佳初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基 為 WPM 6 BA 0 4 mg L NAA 0 4 mg L 誘導(dǎo) 率達(dá)90 65 平均萌芽數(shù)為2 90個 平均芽高 2 70 cm 最佳的繼代增殖培養(yǎng)基為WPM 6 BA 2 0 mg L NAA 0 2 mg L 采用平鋪的方式接種 培養(yǎng)25 d增殖系數(shù)可達(dá)5 21 最佳的生根培養(yǎng)基 為1 2WPM 6 BA 0 3 mg L NAA 0 5 mg L PP333 200 mg L 平均9 85 d即可生根 生根率 高達(dá)98 85 平均生根數(shù)為18 87條 移栽基質(zhì) 選擇椰糠 谷殼 4 1 v v 移栽成活率最高 可達(dá)98 67 建立的組培快繁技術(shù)體系可適用 于巴西人參工廠化育苗生產(chǎn) 為巴西人參快速繁 殖 緩解種苗短缺的市場需求提供了技術(shù)保障 參考文獻(xiàn) 1 陳路 劉遠(yuǎn)俊 馬小軍 等 巴西人參化學(xué)成分和藥 理活性研究進(jìn)展 J 生物資源 2017 39 1 10 16 2 高輝 巴西人參的化學(xué)成份研究 D 濟(jì)南 山東大 學(xué) 2007 3 Almeida I V D sman E Mattge G I et al In vivo anti mutagenic activity of the medicinal plants Pfaffia glomerata Brazilian ginseng and Ginkgo biloba J Genetics and Molecu lar Research 2017 16 3 1 11 4 卞慶亞 羅崇念 馬小軍 國外對法菲西研究進(jìn)展 J 中草藥 2002 33 5 附1 附2 5 Mendes F R Carlini E A Brazilian plants as possible adaptogens An ethnopharmacological surve of books edited in Brazil J Journal of Ethnopharmacology 2007 109 3 493 500 6 Neto A G Costa JML C Belati C C et al Analgesic and anti inflammatory activity of a crude root extract of Pfaffia glomerata Spreng Pedersen J Journal of Thnopharmacolo gy 2005 96 1 2 87 91 341 第1期 蔣華 巴西人參組培快繁體系的建立 7 趙維合 多效唑?qū)Μm菲亞生長發(fā)育及活性成分的影 響 D 南寧 廣西大學(xué) 2007 8 Oliveira D V D Izulmc Rita Imaculada Santos Martins I S et al Cryopreservation of shoot tips of Brazilian Ginseng Pfaffia glomerata Spreng Pedersen by vitrification J Jour nal of Agricultural Science 2019 11 11 146 155 9 Nicoloso F T Erig A C Effect of type of nodal segment and size of vessel on growth of Pfaffian glomerata in vitro plants J Ci enc agrotec Lavras Edi o Especial 2002 10 1499 1506 10 Russowski D Nicoloso F T Nitrogen and phosphorus on growth of brazilian ginseng Pfaffia glomerata Spreng Ped ersen in vitro cultured plants J Ci encia Rural 2003 33 1 57 63 11 Maldaner J Teixeira N F Dos S E S et al Sucrose and nitrogen on in vitro multiplication of Pffafia glomerata Spreng Pedersen J Ci encia Rural 2006 36 4 1201 1206 12 Saldanha C W Otoni C G Notini M M et al A CO2 enriched atmosphere improves in vitro growthof Brazilian ginseng Pfaffia glomerata Spreng Pedersen J In Vitro Cell Dev Biol Plant 2013 49 4 433 444 13 Vasconcelos J M Saldanha C W Dias L L C et al In vitro propagation of Brazilian ginseng Pfaffia glomerata Spreng Pedersen as affected by carbon sources J In Vitro Cell Dev Biol Plant 2014 50 6 746 751 14 凌征柱 劉園 馬小軍 等 琺菲亞的組織培養(yǎng)快速 繁殖研究 J 種子 2006 25 10 23 29 15 劉園 琺菲亞的組織培養(yǎng)技術(shù)研究 D 南寧 廣 西大學(xué) 2007 16 許鴻源 解云英 梁瓊月 等 靈發(fā)素 LFS 直接誘 導(dǎo)建成巴西人參再生植株的研究 J 種子 2013 32 2 69 71 17 何芳蘭 高山杜鵑組織培養(yǎng)關(guān)鍵技術(shù)研究 D 蘭 州 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006 18 李玲莉 柔枝松和紅錐的組織培養(yǎng)研究 D 北京 北京林業(yè)大學(xué) 2010 19 白宇清 王定躍 謝麗娟 毛棉杜鵑莖段組織培養(yǎng) 技術(shù)的研究 J 北方園藝 2020 8 66 73 20 葉雯 袁超群 秦偉 等 火焰南天竹莖段離體培養(yǎng) 再生體系的優(yōu)化 J 浙江農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào) 2020 37 2 391 396 21 倪鐘 陳瑞丹 北京地區(qū)優(yōu)良梅花栽培品種莖段啟 動培養(yǎng)研究 J 中國園林 2020 37 S 64 66 22 孫姿 夏蠟梅組織培養(yǎng)技術(shù)研究 D 南京 南京 林業(yè)大學(xué) 2015 23 楊宏艷 金英庭 禹潔 等 大葉石蝴蝶組培苗根系 形態(tài)對不同生長素的響應(yīng) J 西部林業(yè)科學(xué) 2019 48 6 105 110 24 韋如萍 胡德活 晏姝 等 植物生長調(diào)節(jié)劑和基質(zhì) 種類對杉木無性系瓶外生根組培苗質(zhì)量的影響 J 西南林 業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào) 自然科學(xué)版 2019 39 6 49 56 25 Flores R Nicoloso F T Maldaner J et al Benzylamin opurine BAP and thidiazuron TDZ on in vitro propagation of Pfaffia glomerata Spreng Pedersen J Rev Bras Pl Med Botucatu 2009 11 3 292 299 26 Nicoloso F T Erig A C Martins C F et al Micro propagation of Brazilian ginseng Pfaffia glomerata Spreng Pedersen J Rev Bras Pl Med Botucatu 2001 3 2 11 18 27 付傳明 冼康華 蘇江 等 植物激素和接種方式對 廣西金線蓮壯苗生根的影響 J 廣西植物 2019 39 12 1628 1635 28 劉海龍 陳博雯 肖玉菲 等 澳洲茶樹組培繼代增 殖技術(shù)優(yōu)化 J 西部林業(yè)科學(xué) 2017 46 5 23 28 29 黃曉紅 藥用植物廣豆根組培快繁體系的建立 D 南寧 廣西大學(xué) 2012 30 羅敦 黃漢林 吳坤林 等 移栽基質(zhì)對香樟組培苗 生長的影響 J 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2020 48 2 130 132 31 李水根 李秀芬 殷麗青 等 喜馬拉雅櫻花嫩莖離 體快繁體系優(yōu)化 J OL 分子植物育種 http kns cnki net kcms detail 46 1068 S 20191227 1723 012 html 2019 12 30 編輯 劉永剛 441西 部 林 業(yè) 科 學(xué) 2021年