ICS 67 080 10 B 31 中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) NY T 2032 2011 農(nóng)作物優(yōu)異種質(zhì)資源評價(jià)規(guī)范 梨 Evaluating standards for elite and rare germplasm resources Pear Pyrus L 2011 09 01 發(fā)布 2011 12 01 實(shí)施 中華人民共和國農(nóng)業(yè)部 發(fā)布 NY T 2032 2011 前 言 本標(biāo)準(zhǔn)按照 GB T 1 1 2009 給出的規(guī)則起草 本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部種植業(yè)管理司提出 本標(biāo)準(zhǔn)由全國果品標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會 SAC TC 501 歸口 本標(biāo)準(zhǔn)起草單位 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹研究所 湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果 樹茶葉研究所 本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人 曹玉芬 胡紅菊 江用文 田路明 田瑞 董星光 楊曉平 熊興平 NY T 2032 2011 農(nóng)作物優(yōu)異種質(zhì)資源評價(jià)規(guī)范 梨 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了梨屬 Pyrus L 優(yōu)異種質(zhì)資源評價(jià)的術(shù)語定義 技術(shù)要求 鑒定方法和判定 本標(biāo)準(zhǔn)適用于梨屬 Pyrus L 優(yōu)異種質(zhì)資源評價(jià) 2 規(guī)范性引用文件 下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的 凡是注日期的引用文件 僅注日期的版本適用于本文 件 凡是不注日期的引用文件 其最新版本 包括所有的修改單 適用于本文件 GB T 6194 水果 蔬菜可溶性糖測定法 GB T 12456 食品中總酸的測定 NY T 1307 農(nóng)作物種質(zhì)資源鑒定技術(shù)規(guī)程 梨 NY T 1388 梨果肉中石細(xì)胞含量的測定 重量法 3 術(shù)語和定義 NY T 1307 中界定的以及下列術(shù)語和定義適用于本文件 3 1 優(yōu)良種質(zhì)資源 elite germplasm resources 主要經(jīng)濟(jì)性狀表現(xiàn)好且具有重要價(jià)值的種質(zhì)資源 3 2 特異種質(zhì)資源 rare germplasm resources 性狀表現(xiàn)特殊的 稀有的種質(zhì)資源 3 3 優(yōu)異種質(zhì)資源 elite and rare germplasm resources 優(yōu)良種質(zhì)資源和特異種質(zhì)資源的總稱 4 技術(shù)要求 4 1 樣品采集 按 NY T 1307 的規(guī)定執(zhí)行 4 2 鑒定數(shù)據(jù) 每個(gè)性狀至少應(yīng)在同一地點(diǎn)進(jìn)行 3 年的重復(fù)鑒定 性狀觀測值取其 3 年平均值進(jìn)行判定 4 3 指標(biāo) 4 3 1 優(yōu)良種質(zhì)資源指標(biāo) 優(yōu)良種質(zhì)資源指標(biāo)見表 1 表 1 優(yōu)良種質(zhì)資源指標(biāo) 序號 性狀 指 標(biāo) 1 單果重 秋子梨 50 g 白梨 砂梨 西洋梨 150 g 2 汁液 多 參照種質(zhì) 碭山酥梨 3 可溶性固形物含量 早熟種質(zhì) 11 中熟種質(zhì) 12 晚熟種質(zhì) 13 1 NY T 2032 2011 表 1 續(xù) 序號 性狀 指 標(biāo) 4 石細(xì)胞含量 每百克果肉石細(xì)胞含量 0 5 g 5 果心大小 果心橫徑與果實(shí)橫徑比值 1 3 6 貯藏性 貯藏期 120 d 7 始果年齡 3年 提供參照種質(zhì)的信息是為了方便本標(biāo)準(zhǔn)的使用 不代表對該種質(zhì)的認(rèn)可和推薦 任何可以得到與參照種質(zhì)結(jié)果相 同的種質(zhì)均可作為參照樣品 4 3 2 特異種質(zhì)資源指標(biāo) 特異種質(zhì)資源指標(biāo)見表 2 表 2 特異種質(zhì)資源指標(biāo) 序號 性狀 指 標(biāo) l 樹姿 下垂 2 節(jié)間長度 2 0 cm 3 花冠直徑 5 0 cm 4 花瓣層數(shù) 雙層以上 5 單果重 500 g 6 果面顏色 全紅 7 果肉顏色 紅色 8 香氣 濃 參照種質(zhì) 南果梨 9 種子數(shù)量 0 10 果實(shí)發(fā)育期 80 d 11 自花結(jié)實(shí)率 30 12 可溶性糖含量 12 5 13 可滴定酸含量 1 5 14 褐變度 OD值 0 03 15 石細(xì)胞含量 每百克果肉石細(xì)胞含量 0 05 g 16 染色體數(shù) 2n 34 17 梨黑星病抗性 病情指數(shù) SI 10 0 18 梨黑斑病抗性 病情指數(shù) BI 10 0 19 梨腐爛病抗性 發(fā)病率 x 10 0 20 梨輪紋病抗性 病情指數(shù) RI 5 0 21 耐鹽性 鹽害指數(shù) SI 10 0 22 耐旱性 旱害指數(shù) DI 20 0 23 耐澇性 澇害指數(shù) WI 20 0 提供參照種質(zhì)的信息是為了方便本標(biāo)準(zhǔn)的使用 不代表對該種質(zhì)的認(rèn)可和推薦 任何可以得到與參照種質(zhì)結(jié)呆相 同的種質(zhì)均可作為參照樣品 5 鑒定方法 5 1 樹姿 按 NY T 1307 的規(guī)定執(zhí)行 5 2 節(jié)間長度 按 NY T 1307 的規(guī)定執(zhí)行 5 3 花冠直徑 按 NY T 1307 的規(guī)定執(zhí)行 5 4 花瓣層數(shù) 2 NY T 2032 2011 在盛花期 觀察記載發(fā)育正常的花朵花瓣的層數(shù) 5 5 單果重 按 NY T 1307 的規(guī)定執(zhí)行 5 6 果面顏色 在果實(shí)成熟期 選取 10 個(gè)典型果實(shí) 用標(biāo)準(zhǔn)比色卡按最大相似原則確定果面顏色 5 7 果肉顏色 在果實(shí)成熟期 選取典型果實(shí) 將果實(shí)切開 用標(biāo)準(zhǔn)比色卡按最大相似原則確定果面顏色 5 8 汁液 按 NY T 1307 的規(guī)定執(zhí)行 5 9 香氣 按 NY T 1307 的規(guī)定執(zhí)行 5 10 果心大小 按 NY T 1307 的規(guī)定執(zhí)行 5 11 種子數(shù)量 在果實(shí)成熟期 從樹體的不同方位 隨機(jī)選取 10 個(gè)典型果實(shí) 將果實(shí)切開取出種子 計(jì)數(shù)每個(gè)果實(shí) 種子數(shù)量 計(jì)算平均每個(gè)果實(shí)種子數(shù)目 5 12 果實(shí)發(fā)育期 盛花期至果實(shí)成熟期所經(jīng)歷的天數(shù) 5 13 自花結(jié)實(shí)率 于大蕾期 對 100 個(gè)花序進(jìn)行套袋 落花后 4 周摘袋 調(diào)查統(tǒng)計(jì)花序坐果的百分率 5 14 可溶性固形物含量 在果實(shí)成熟期 從樹體的不同部位隨機(jī)取鮮果 20 個(gè) 按 NY T 1307 的規(guī)定測定可溶性固形物 5 15 可溶性糖含量 在果實(shí)成熟期 根據(jù)果實(shí)大小 從樹體的不同方位隨機(jī)取鮮果 20 個(gè) 按 GB T 6194 的規(guī)定測定可溶性糖含量 5 16 可滴定酸含量 在果實(shí)成熟期 根據(jù)果實(shí)大小 從樹體的不同方位隨機(jī)取鮮果 20 個(gè) 按 GB T 12456 的規(guī)定測定可滴定酸含量 5 17 褐變度 參見附錄 A 5 18 石細(xì)胞含量 按 NY T 1388 的規(guī)定執(zhí)行 5 19 始果年齡 按 NY T 1307 的規(guī)定執(zhí)行 5 20 染色體數(shù) 參見附錄 B 5 21 梨黑星病抗性 按 NY T 1307 的規(guī)定執(zhí)行 5 22 梨黑斑病抗性 按 NY T 1307 的規(guī)定執(zhí)行 3 NY T 2032 2011 5 23 梨腐爛病抗性 按 NY T 1307 的規(guī)定執(zhí)行 5 24 梨輪紋病抗性 按 NY T 1307 的規(guī)定執(zhí)行 5 25 耐鹽性 參見附錄 C 5 26 耐旱性 參見附錄 D 5 27 耐澇性 參見附錄 E 5 28 貯藏性 參見附錄 F 6 判定 6 1 優(yōu)良種質(zhì)資源 符合表 1 中 7 項(xiàng)指標(biāo)中任意 5 項(xiàng)以上 含 5 項(xiàng) 指標(biāo)的梨種質(zhì)資源 6 2 特異種質(zhì)資源 符合表 2 中任意 1 項(xiàng)以上 含 1 項(xiàng) 指標(biāo)的梨種質(zhì)資源 4 NY T 2032 2011 附 錄 A 資料性附錄 梨種質(zhì)資源果實(shí)褐變度測定方法 A 1 試劑與材料 A 1 1 試劑 90 乙醇 A 1 2 材料 梨成熟的果實(shí) A 2 儀器 A 2 1 紫外可見分光光度計(jì) 波長范圍 200 nm l 000 nm A 2 2 高速組織搗碎機(jī) 轉(zhuǎn)速 10 000 r min 12 000 r min A 2 3 離心機(jī) 轉(zhuǎn)速 10 000 r min 12 000 r min A 2 4 電子天平 精密度 0 001 g A 2 5 移液器 1000 L 5 000 L A 2 6 量筒 100 mL A 3 采樣 于果實(shí)成熟期 選擇生長勢中等 產(chǎn)量較一致的植株 10 株 根據(jù)果實(shí)大小 從樹體的不同方位隨機(jī) 取鮮果 10 個(gè) 20 個(gè) 單果重 200 g 取 10 個(gè)果實(shí) 50 g 單果重 200 g 取 15 個(gè)果實(shí) 單果重 50 g 取 20 個(gè)果實(shí) 用于測定 A 4 分析步驟 去掉果皮 采用四分法稱取果肉 50 g 加入 100 mL 蒸餾水 放入高速組織搗碎機(jī)搗碎 將勻漿離心 20 min 靜置 30 min 后取上清液 10 mL 加入 90 乙醇 15 mL 搖勻 離心 10 min 取上清液 用紫外可 見分光光度計(jì) 以蒸餾水為空白對照 測定 420 nm 下上清液的 OD 值 A 5 結(jié)果計(jì)算 數(shù)值測定重復(fù) 3 次 結(jié)果取平均值 計(jì)算結(jié)果表示到小數(shù)點(diǎn)后三位 5 NY T 2032 2011 附 錄 B 資料性附錄 梨種質(zhì)資源染色體數(shù)鑒定方法 B 1 試劑與材料 B 1 1 試劑 B 1 1 1 8 羥基喹啉 2 mmol L 稱取 0 3 g 8 羥基喹啉溶于 100 mL 蒸餾水中 溶液避光保存 B 1 1 2 0 05 秋水仙堿溶液 B 1 1 3 0 075 mol L 氯化鉀 稱取氯化鉀 5 592g 置于容量瓶內(nèi) 加蒸餾水至 1000 mL B 1 1 4 甲醇冰醋酸固定液 甲醇和冰醋酸按體積 3 1 配制而成 現(xiàn)用現(xiàn)配 B 1 1 5 混合酶溶液 2 5 纖維素酶溶液和 2 5 果膠酶溶液 1 1 混合 B 1 1 6 磷酸鹽緩沖液 0 2 mol L pH6 8 0 2 mol L 的磷酸氫二鈉 49 mL 與 0 2 mol L 的磷酸二 氫鈉 51 mL 混合而成 B 1 1 7 吉姆薩染色液 稱取吉姆薩粉末 1g 甘油 66 mL 先將吉姆薩粉末溶于少量甘油中 在研缽 內(nèi)研磨 30 min 以上 至無顆粒為止 再倒入剩余甘油 于 56 恒溫箱中保溫 2h 后 再加入 66 mL 甲醇 攪勻后保存于棕色瓶中 即成吉姆薩母液 取吉姆薩母液 1 mL 加入 0 2 mol L pH6 8 的磷酸鹽緩沖 液 9 mL 稀釋 B 1 2 材料 梨幼葉或幼芽 B 2 儀器設(shè)備 B 2 1 顯微鏡 B 2 2 眼科鑷子 B 2 3 刀片 B 2 4 載玻片 B 2 5 照相機(jī) B 2 6 移液器 1 000 L 5 000 L B 2 7 電子天平 精密度為 0 001 g B 2 8 容量瓶 50 mL 100 mL B 2 9 量筒 100 mL B 2 10 恒溫培養(yǎng)箱 B 2 11 酒精燈 B 3 采樣 在新梢生長期 上午采集幼葉或幼芽 B 4 分析步驟 將采集的幼葉或幼芽 置于 0 002 mol L 8 羥基喹林的 0 05 秋水仙堿溶液里浸泡 3 h 5 h 進(jìn)行 6 NY T 2032 2011 前處理 將材料切碎 約 1 mm 3 左右 在 0 075 mol L KCl 溶液里處理 30 min 去掉 KC1 加入新配制的 甲醇冰醋酸固定液固定 30 min 以上 去掉固定液 用蒸餾水沖洗 2 次 3 次 加入 2 5 混合酶液 25 條件下酶解去壁 2 h 3 h 用重蒸水沖洗酶液 材料在重蒸水中停留 10 min 15 min 進(jìn)行低滲處理 棄 去重蒸水 加入新配制的甲醇冰醋酸固定液 涂片 將材料放在預(yù)先在冷水中預(yù)冷的載玻片上 加一滴固 定液 用鑷子涂片 火焰干燥 用 40 1 的 pH6 8 7 2 磷酸緩沖液稀釋的 Giemsa 液染色 3 h 4 h 流水 沖洗 空氣干燥 B 5 結(jié)果計(jì)算 在 100 倍生物顯微鏡下觀察 取形態(tài)清晰 數(shù)目完整的分裂相 對單個(gè)細(xì)胞中分散良好的染色體進(jìn) 行計(jì)數(shù) 每一份種質(zhì)計(jì)數(shù) 20 個(gè)細(xì)胞以上 染色體數(shù)精確到 條 7 NY T 2032 2011 附 錄 C 資料性附錄 梨種質(zhì)資源耐鹽性鑒定方法 C 1 試劑與材料 C 1 1 試劑 NaCl C 1 2 材料 試材為種子 處理與對照各 100 粒 200 粒 C 2 儀器與設(shè)備 有遮雨設(shè)備的栽培槽 槽底部應(yīng)保持不滲漏水 土壤質(zhì)地為砂壤土 C 3 采樣 在果實(shí)成熟期 采集待鑒定及對照種子各 100 粒 200 粒 經(jīng)層積處理 備用 C 4 分析步驟 將通過層積解除休眠的種子 播種于有遮雨設(shè)備的栽培槽中 常規(guī)管理 待實(shí)生苗長至 30 cm 高時(shí) 測定土壤含鹽濃度 并向槽內(nèi)土壤均勻澆人可使土壤鹽含量達(dá)到 0 3 的相應(yīng) NaCl 溶液 以不澆 NaCl 溶液并含有相同土壤水含量槽的實(shí)生苗木為對照組 保持土壤中水的含量和鹽的濃度至 2 個(gè)月 目測觀察方式 按表 C 1 分級標(biāo)準(zhǔn)調(diào)查記載實(shí)生苗木受鹽害的狀況 3 次重復(fù) C 5 結(jié)果計(jì)算 C 5 1 鹽害級別 鹽害分級按表 C 1 的標(biāo)準(zhǔn)確定 表 C 1 鹽害分級標(biāo)準(zhǔn) 級別 0 1 2 3 4 5 分級標(biāo)準(zhǔn) 與對照無明 顯區(qū)別 個(gè)別葉緣出 現(xiàn)淺褐色 多數(shù)葉緣出 現(xiàn)淺褐色 30 以下葉 片枯死 30 50 葉片枯死 50 以上葉 片枯死 C 5 2 鹽害指數(shù) 鹽害指數(shù)以 SI 表示 按式 C 1 計(jì)算 100 5 ii xn SI N C 1 n i 各級鹽害株數(shù) 單位為個(gè) x i 各級鹽害代表級值 N 總株數(shù) 單位為個(gè) 鹽害指數(shù)以 2 次 3 次重復(fù)測定的平均值計(jì) 結(jié)果表示到小數(shù)點(diǎn)后 2 位 C 5 3 耐鹽性 8 NY T 2032 2011 依據(jù)鹽害指數(shù)按表 C 2 的標(biāo)準(zhǔn)確定耐鹽性 表 C 2 耐鹽性評價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 級別 極強(qiáng) 強(qiáng) 中等 弱 極弱 分級標(biāo)準(zhǔn) SI 30 30 SI 50 50 SI 60 60 SI 70 SI 70 9 NY T 2032 2011 附 錄 D 資料性附錄 梨種質(zhì)資源耐旱性鑒定方法 D 1 試劑與材料 試材為種子 處理與對照各 100 粒 200 粒 D 2 儀器設(shè)備 有遮雨設(shè)備的栽培槽 池底部應(yīng)保持不滲漏水 土壤質(zhì)地為砂壤土 D 3 采樣 在果實(shí)成熟期 采集待鑒定及對照種子各 100 粒 200 粒 經(jīng)層積處理 備用 D 4 實(shí)驗(yàn)步驟 將通過層積解除休眠的種子 播種于有遮雨設(shè)備的栽培槽中 常規(guī)管理 待實(shí)生苗長至 30 cm 高時(shí) 停止灌水 停水 50 d 后調(diào)查旱害情況 以正常澆水的植株為對照 3 次重復(fù) D 5 結(jié)果及計(jì)算 D 5 1 旱害分級標(biāo)準(zhǔn) 旱害分級按表 D 1 的標(biāo)準(zhǔn)確定 表 D 1 旱害分級標(biāo)準(zhǔn) 級別 0 1 2 3 4 5 分級標(biāo)準(zhǔn) 生長發(fā)育與 對照無異 葉片輕度 萎蔫 葉片中度 萎蔫 葉片嚴(yán)重 萎蔫 葉片部分 脫落 葉片全部 脫落 D 5 2 旱害指數(shù) 旱害指數(shù)以 DI 表示 按式 D 1 計(jì)算 100 5 ii xn DI N D 1 式中 n i 各級旱害株數(shù) 單位為個(gè) x i 各級旱害代表級值 N 總株數(shù) 單位為個(gè) 旱害指數(shù)以 2 次 3 次重復(fù)測定的平均值計(jì) 結(jié)果表示到小數(shù)點(diǎn)后 2 位 D 5 3 耐旱性 依據(jù)旱害指數(shù)按表 D 2 的標(biāo)準(zhǔn)確定耐旱性 表 D 2 耐旱性評價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 分級標(biāo)準(zhǔn) DI 30 30 DI 50 50 DI 60 60 DI 70 l DI 70 10 NY T 2032 2011 附 錄 E 資料性附錄 梨種質(zhì)資源耐澇性鑒定方法 E 1 試劑與材料 試材為種子 處理與對照各 100 粒 200 粒 E 2 儀器設(shè)備 有遮雨設(shè)備的栽培槽 槽底部應(yīng)保持不滲漏水 土壤質(zhì)地為砂壤土 E 3 采樣 在果實(shí)成熟期 采集待鑒定及對照種子各 100 粒 200 粒 經(jīng)層積處理 備用 E 4 實(shí)驗(yàn)步驟 將通過層積解除休眠的種子 播種于有遮雨設(shè)備的栽培槽中 常規(guī)管理 待實(shí)生苗長至 30 cm 高時(shí) 灌水進(jìn)行水浸處理 水量保持超過土表面 以正常澆水植株為對照 處理后 50 d 目測受害情況 E 5 結(jié)果及計(jì)算 E 5 1 澇害分級標(biāo)準(zhǔn) 澇害分級按表 E 1 的標(biāo)準(zhǔn)確定 表 E 1 澇害分級標(biāo)準(zhǔn) 級別 0 1 2 3 4 5 分級標(biāo)準(zhǔn) 生長發(fā)育與 對照無異 少數(shù)葉片 葉緣出現(xiàn)棕色 多數(shù)葉片 葉緣出現(xiàn)棕色 30 以下 葉片枯死 30 50 葉片枯死 50 以上 葉片枯死 E 5 2 澇害指數(shù) 澇害指數(shù)以 WI 表示 按式 E 1 計(jì)算 100 5 ii xn WI N E 2 式中 n i 各級澇害株數(shù) 單位為個(gè) x i 各級澇害代表級值 N 總株數(shù) 單位為個(gè) 澇害指數(shù)以 2 次 3 次重復(fù)測定的平均值計(jì) 結(jié)果表示到小數(shù)點(diǎn)后 2 位 E 5 3 耐澇性 依據(jù)澇害指數(shù)按表 E 2 的標(biāo)準(zhǔn)確定耐澇性 表 E 2 耐澇性評價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 級別 極強(qiáng) 強(qiáng) 中等 弱 極弱 分級標(biāo)準(zhǔn) WI 30 30 WI 50 50 WI 60 60 WI 70 WI 70 11 NY T 2032 2011 附錄 F 資料性附錄 梨種質(zhì)資源貯藏性鑒定方法 F 1 試劑與材料 梨成熟果實(shí) 50 kg F 2 儀器設(shè)備 冷庫 溫度 0 0 5 相對濕度 90 95 F 3 采樣 在果實(shí)成熟期采摘梨成熟的典型果實(shí) 50 kg F 4 實(shí)驗(yàn)步驟 將梨果實(shí) 50 kg 置于冷庫中貯藏 每隔 20 d 取出 10 個(gè)果實(shí) 置于 20 回溫 模擬貨架期 觀察記 錄或測定回溫 0 d 1d 2 d 7 d 果實(shí)品質(zhì) 果面及色澤 果實(shí)風(fēng)味 硬度 生理性病變 腐爛等 的 變化情況 F 5 結(jié)果與計(jì)算 F 5 1 貯藏期 在保證貨架期 5 d 7 d 果面色澤 風(fēng)味正常 無或極少有生理性病變或腐爛 的前提下 計(jì)算從采 摘至失去商品價(jià)值所歷的天數(shù)為貯藏期 貯藏期以 2 次 3 次重復(fù)測定的平均值計(jì) 以 d 表示 F 5 2 貯藏性 依據(jù)貯藏期按表 F 1 的標(biāo)準(zhǔn)確定貯藏性 表 F 1 貯藏性評價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 貯藏性 強(qiáng) 中 弱 分級標(biāo)準(zhǔn) 貯藏期 120 d 60 d 貯藏期 120 d 貯藏期 60 d 12